懸臂陣列微加工

高通量細胞收縮測試裝置

典型應用：

1、心肌細胞成熟度測定
功能性 iPSC 誘導的心肌細胞纖維

2、牽引力測定
細胞在基質上施加的力的量化

3、Durotaxis 和 haptotaxis 測定
控制基材剛度

4、3D CM 成熟度測定
評估 iPSC-CM 的跳動

5、單CM收縮力
單個心肌細胞搏動力的量化

世聯(lián)博研北京公司測試方案：

一、細胞收縮力高通量檢測多孔板-24、96、384孔板：

圖1：原理圖：

1.1）細胞收縮力測試24孔板

1.2）細胞收縮力測試96孔板

1.3）細胞收縮力測試384孔板

懸臂陣列微加工    細胞收縮力測試系統(tǒng)

圖案的*微孔板，上面有100,000多個均勻分布的X或+形的具有粘性蛋白質微圖案，細胞沉降并附著在其上，嵌入板中的X具有彈性，因此每當細胞收縮時它們就會收縮。 X帶有分子標記，可以發(fā)出熒光，從而可以成像和量化縮小的形狀。

可以成像和定量，因此研究人員可以將X或十字架的變形與單個細胞或成千上萬個細胞的一定量的力相關聯(lián)。該技術還為研究人員提供了查看單個細胞鈣反應以及它們與細胞強度之間的關系的能力。

該技術也可以用于藥物發(fā)現(xiàn)。研究人員可以快速，輕松地測試不同的治療分子，以了解它們如何影響細胞力以及是否可以糾正任何潛在的力問題。

在具有可控剛度的彈性薄膜中嵌入用戶設計的粘合劑和熒光微圖案，形成非常密集但均勻的陣列(> 120微米/每平方毫米)。100000個患者來源的單細胞(地從疾病起源的人體組織中獲得)獨立地定位并粘附在微圖案上(每個微圖案一個細胞)，它們對該微圖案施加牽引力并明顯改變其形狀，從而能夠在*的吞吐量下對細胞收縮性進行直觀的基于圖像的評估。

1)熒光彈性可收縮表面的微圖案化

—在具有可控剛度的彈性薄膜中嵌入用戶設計的粘合劑和熒光微圖案，形成非常密集但均勻的陣列(> 120微米/每平方毫米)。100000個患者來源的單細胞(地從疾病起源的人體組織中獲得)獨立地定位并粘附在微圖案上(每個微圖案一個細胞)，它們對該微圖案施加牽引力并明顯改變其形狀，從而能夠在*的吞吐量下對細胞收縮性進行直觀的基于圖像的評估。

2)基于圖像的受控單細胞收縮性的動力學可視化

—例如，384孔板內的每個附著細胞的微圖案在延長的時間內以精細的時間分辨率被獨立監(jiān)控，以直接觀察收縮行為的全部范圍，從緊張性收縮到誘導性收縮或松弛，以及任一效應的作用窗口。選擇“x"形微圖案以小化細胞-基底接觸面積，同時大化細胞擴散面積，從而在不同位置產(chǎn)生放大和集中的力。由于每個微圖案都與其他微圖案機械分離，粘附的細胞不會將應變傳遞給相鄰的微圖案，從而確保對群體中每個單個細胞的收縮力進行可靠的評估。

3)單細胞收縮性的自動化和直觀的圖像分析

—基于該方法的檢測產(chǎn)生直觀、明確的收縮信號——提供直接的圖像分析，以從成像群體中的每個單細胞獲得定量和可靠的數(shù)據(jù)。

可以同時獲取1000多個均勻圖案的單細胞的強大的收縮性數(shù)據(jù)，并與96-和384孔板格式無縫地集成，以促進大規(guī)模的藥物篩選

二、細胞牽引力顯微鏡及微柱陣列介紹

圖4：細胞牽引力顯微鏡

圖5：細胞微柱陣列，可定制剛度、大小、形狀和間距。

細胞微柱陣列介紹

特點：

將細胞培養(yǎng)在具有形貌特征，微柱且具有特定剛度的基質上。 可以以高密度分布微柱以創(chuàng)建細胞施加的力的圖（牽引力顯微鏡），或者它們的大小和排列可以具有細胞大小，因此可用于測量單個細胞的整體收縮力。

●PDMS微柱的偏轉可實現(xiàn)力感測

●PDMS微柱的剛度由其尺寸（Durotaxis）控制

●提供幾種微柱幾何形狀和布置

●單細胞力作圖（牽引力顯微鏡）

●可控的生物功能化

●適應任何細胞培養(yǎng)底物（從培養(yǎng)皿到96孔板）

●與高分辨率光學顯微鏡系統(tǒng)兼容

典型應用：

>單心肌細胞收縮力測定：定量單心肌細胞的搏動力

>牽引力測定：定量細胞在基質上施加的力

可訂購的產(chǎn)品

1、圓形PDMS微柱10 mm蓋玻片：

標準尺寸：24 mm圓形蓋玻片（約170μm厚度）
設計：直徑為5 ?m； 中心到中心的距離為7 ?m
三種高度可供選擇：2 ?m，6 ?m和12 ?m

2、帶狀柱子的蓋玻片：

3、方形微柱蓋玻片

設計：直徑7.5 ?m； 微柱之間的距離為20 ?m

三種高度可供選擇：2 ?m，6 ?m和12 ?m

探索應用示例

我們提供帶有微型PDMS微柱的10毫米蓋玻片，用于細胞培養(yǎng)和力評估。

不同的支柱設計和布置適合各種應用，例如牽引力顯微鏡，收縮力和旋轉軸。

通過測量PDMS微柱響應于細胞施加的力的撓度來進行力評估。

直接接種細胞
>多種設計可供選擇
可用高密度和低密度微柱以及不同縱橫比的基板。
>兼容高分辨率顯微鏡。

易于觀察細胞及其對微柱變形的影響

臨床和體外 細胞基質應用共同的一個關鍵設計方面是 基質宏觀和微觀結構，包括基質孔徑和幾何形狀、孔隙率、孔的互連性和表面拓撲結構 。這些多孔結構的高表面積允許細胞向內生長和錨定，以及液體和營養(yǎng)物質的運輸。根據(jù)所培養(yǎng)的細胞或組織的類型，支架的微孔率對于毛細血管生長以及細胞與基質之間的相互作用很重要，而結構的大孔率對于營養(yǎng)物質和細胞代謝廢物的運輸很重要 。

細胞基質可以使用天然和合成材料制造，通常采用水凝膠的形式，具有高含水量的交聯(lián)網(wǎng)絡，在該應用中顯示出高效[。天然衍生的聚合物材料，例如膠原蛋白、絲心蛋白、殼聚糖、藻酸鹽和淀粉，是早用于細胞培養(yǎng)的生物材料 ，并且通常表現(xiàn)出良好的生物相容性和生物降解性，盡管批次之間的差異性和一些聚合物的加工難度是顯著的缺點。合成聚合物，例如聚乙醇酸 (PLG) 和聚乳酸 (PLA)，雖然通常比其天然對應物的生物相容性更低，但為更好地控制關鍵特性提供了機會，例如表面體積比、孔隙率和機械性能 。

細胞力產(chǎn)生和力傳遞綜合測量分析系統(tǒng)

1、背景和解決方案：

       在生理和病理條件下，細胞本身產(chǎn)生的或細胞外基質 (ECM) 通過粘著斑 (FA) 和粘附連接 (AJ) 傳遞的機械力已知在調節(jié)各種細胞行為中發(fā)揮重要作用。

細胞胞力的產(chǎn)生和力的傳遞：

對于許多生物過程至關重要，量化通過基于E-鈣粘蛋白的粘附連接施加的細胞-細胞和細胞內力，將在生物學研究領域闡明與機械力響應相關的細胞功能方面發(fā)揮基礎性作用，

該系統(tǒng)為理解生物力學力在單個細胞、多細胞以及細胞-細胞/細胞-ECM 界面上的作用的提供了新方法，將為革新再生醫(yī)學、疾病建模和藥物發(fā)現(xiàn)的突破性技術打開大門，

闡明了細胞遷移、增殖、分化、重塑和機械感知其微環(huán)境的機制的許多方面。

2、該系統(tǒng)綜述：

該系統(tǒng)支持基于微柱陣列法、FLECS熒光彈性基底微圖案法、集成熒光微珠嵌入聚丙烯酰胺凝膠法、PDMS合規(guī)的薄硅膜法，集優(yōu)棄劣進行力生成和應力傳遞分析，可以2D細 胞，也可以3D細胞嵌入水凝膠中，并結合時間依賴性 (4D)的細胞內源力產(chǎn)生與力傳遞量化分析實驗。可用于單個細胞、多細胞之間、細胞集落和融合細胞層（cell sheet）中的力生成和應力傳遞分析，為理解生物力在單個細胞、細胞集落、細胞-細胞/細胞-ECM界面上的作用提供了新方法，將為革新再生醫(yī)學、疾病建模和藥物發(fā)現(xiàn)的突破性技術打 開大門，闡明了細胞遷移、增殖、分化、重塑和機械感知其微環(huán)境的機制的許多方面，對于深刻理解許多生物過程至關重要。

該系統(tǒng)解決了從具有已知彈性的粘性基底測量的細胞力引起的變形重建細胞基質牽引力和細胞間和細胞內應力的逆問題。除了應力和力生成的標準測量之外，

還可以進行包括線性張力測量（一種專門用于細胞邊界的力傳遞測量），允許用戶設置所必要的分析參數(shù)，選擇感興趣的區(qū)域，檢查輸入?yún)?shù)和中間結果，

并計算描述力、應力及其分布的各種參數(shù)，允許非用戶對此類實驗進行全面評估，可讓您快速分析可視化大型數(shù)據(jù)集。

可選配時差顯微鏡活細胞工作站，為顯微鏡提供類似培養(yǎng)箱的氣體溫度濕度控制；

可選的共聚焦超高分辨率TIRF顯微鏡

2.2、測試方法：

• 2.2.1、細胞微柱陣列：
  
  細胞主要黏附于與基底垂直微柱的上面，可以直接根據(jù)微柱的彎曲變形程度與方向測定與細胞接觸點牽引力的大小與方向。

  2.2.2、熒光微珠嵌入聚丙烯酰胺凝膠：
  
  通過培養(yǎng)在具已知彈性軟基底（聚丙烯酰胺(PA)膠），細胞收縮過程中對基底產(chǎn)生的牽引力使基底產(chǎn)生變形，這種變形反映到熒光微珠的運動；用熒光顯微鏡采集熒光微珠的運動信息，經(jīng)圖像處理后，得到基底的應變信息，然后通過一定的力學模型，定量反演出細胞的牽引力；細胞收縮或遷移過程中各個時刻的力分布就可以可視化在計算機屏幕上

  2.2.3、熒光彈性可收縮表面微圖案化多孔板高通量細胞收縮力檢測多孔板-24、96、384孔板：
  
  該可高通量檢測細胞收縮力的多孔板是軟膜底嵌有熒光微圖案的du特微孔板，上面有100,000多個均勻分布的X或+形的具有粘性蛋白質微圖案，細胞沉降并附著在其上，嵌入板中的X具有彈性，因此每當細胞收縮時它們就會收縮。 X帶有分子標記，可以發(fā)出熒光，從而可以成像和量化縮小的形狀

  2.2.4、合規(guī)PMDS基底多孔板：
  
  采用軟彈性基底，通過細胞與彈性基底相互作用引起的基底變形來測定或計算細胞牽引力

  可定制剛度0.1kPa 至 100 kPa 的楊氏彈性模量、蛋白質涂層

• 2.3、適用樣品：

  2D單個細胞、3D凝膠包埋的細胞、細胞集落和融合細胞層中的力生成和應力分析，細胞收縮力、細胞之間相互用力、細胞與ECM之間相互用力、跨細胞邊界作用力、平均法向應力和剪切應力

• 2.4、典型測試應用：

有許多不同的方法可以測量力的產(chǎn)生和應力。在這里，您可以找到可以使用該程序計算的數(shù)量的概覽。

2.4.3、收縮力

收縮力定義為牽引力向一個點（稱為力中心）的投影之和。因此，如果力都已經(jīng)指向一個中心點，則收縮性很高。局部相反的力和不指向力震中的力對收縮性沒有貢獻。能夠以力似乎源自單個點的方式協(xié)調其力產(chǎn)生的細胞或細胞群可以獲得高收縮性，同時消耗相對少量的應變能。

這在圖13中進一步說明。案例 A 代表具有兩個具有高度協(xié)調力生成的細胞的細胞集落，案例 B 代表具有協(xié)調性的細胞。在情況 B 中，每個細胞自行產(chǎn)生收縮力。因此，如果我們假設情況 A 和 B 中的應變能相等，則情況 B 的收縮性較低。

綜上所述：應變能是總力產(chǎn)生的量度，而收縮性是協(xié)調力產(chǎn)生的量度。

我們的平臺兼容2D/3D/4D模式，支持單細胞、融合單層細胞以及介于兩者之間的細胞。可按需定制，包括孔格式、模量、珠熒光、玻璃厚度和分析軟件的定制。我們可以提供任何組合，制造您想要的，并且樂于為您的挑戰(zhàn)創(chuàng)新解決方案。