專門從蛋白質中去除寡糖
PNGase F PRIME 是一種從腦膜炎黃桿菌克隆的突變重組 PNGase F并從大腸桿菌中表達和純化。與其他商業可用的 PNGase F 來源相比，對 PNGase F 所做的專有更改已被證明具有*的特性。獨立實驗室生成的數據表明，PRIME 在室溫下可在幾分鐘內對天然糖蛋白和血清糖蛋白起作用。消化產物的聚糖分析表明，PNGase F PRIME 消化導致更*的聚糖釋放，并且當在相同的消化條件下以相同的濃度使用時，還允許裂解市售酶未釋放的聚糖。這一進步有利于尋求了解自然環境中糖生物學的應用程序。初步數據表明，與商業來源的酶相比，PNGase F PRIME 對復雜（三觸角和四觸角）唾液酸化結構具有更高的特異性。此外，本文介紹的工作分析化學論文使用 PNGase F PRIME 進行所有原位組織工作，因為市售的 PNGase 酶不適用于天然組織以允許聚糖識別。

PNGase F PRIME-LY 糖苷酶與我們的標準 PNGase F PRIME 是相同的酶，但現在以凍干形式提供，非常適合用于基于溶液的分析。可以使用 PNGase F PRIME-LY 的性能特征和應用與我們的標準液體格式 PNGase F PRIME 酶*相同。

• 非常適合用于高級應用，尤其是那些使用或需要 UPLC/HPLC、親水相互作用色譜 (HILIC) 和/或 MALDI-聚糖質譜成像的應用。

• 釋放的聚糖可以在使用 Waters RapiFluor-MS 染料標記后進行檢查，并使用各種基于 HPLC/UPLC 的系統通過正相親水相互作用色譜 (HILIC) 進行分析。

• 在組織上噴灑酶并在 37°C 下孵育 1 小時后，可以直接對組織上釋放的聚糖進行成像。（在我們的 2mg/mL 標準濃度下，一個 50 µL 小瓶可以制作 4 張載玻片。）可以使用 Bruker Daltonics SolariX™ 7T Hybrid FTMS System、Bruker Daltonics RapifleXTM MALDI Tissuetyper 或 Bruker Daltonics UltrafleXtreme 等儀器檢測聚糖。 MALDI-TOF/TOF 質譜儀。

Peak-a-boo we see you
質譜分析是 PRIME 真正大放異彩的時候。與 PRIME 相比，傳統的 PNGase 提供的峰更少且更鈍。迄今為止，在幾乎所有的并行研究中，PNGase F PRIME 都產生了良好的結果。例如，用 PRIME 治療的天然 Avastin®（基于 IgG1 的癌癥治療劑）會釋放 11 種不同的寡糖結構（以下僅顯示一部分數據）。

在另一個例子中，與非常流行的 PNGase F 相比，PRIME 在切割天然形式的血源性糖蛋白胎球蛋白時產生的峰多 33%、峰更尖且背景低得多。

即使通過 HPLC 分析，相同的處理也顯示出顯著差異。PNGase F PRIME（藍色）比相同的競爭 PNGase F（黑色）顯示出更明顯的峰。還要注意中性和唾液酸化區域的附加峰，特別是 trisialo 區域。

這種更豐富的數據提供了對糖生物學進行更深入、更完整理解的機會。

前列腺癌 FFPE 組織的 N-聚糖成像
如 Powers 等人所述，對人類前列腺癌 (Gleason 7) 的 5 微米 FFPE 切片進行抗原回收并與 PNGase F PRIME™ 一起孵育。使用 7T MALDI-FTICR Solarix 質譜儀和 FlexImaging 4.1 軟件獲取圖像。右上圖顯示的是組織的 H&E 染色圖像（放大 10 倍），腫瘤密度高的區域顯示在圓圈中，用 T 標記。左下圖顯示了典型的腫瘤 N-聚糖單個聚糖的模式，Man6 在 m/z=1419。在右上圖和右下圖中，m/z = 1419（綠色）處的腫瘤聚糖和 m/z = 1976 處的單唾液酸化雙觸角聚糖（右上圖，橙色）顯示了雙聚糖疊加) 和 m/z = 2122 處的單唾液酸化和核心巖藻糖基化聚糖（右下圖，藍色）。

以下引文提供了使用 PRIME™ 的這項研究的更多詳細信息：

Powers TW、Neely BA、Shao Y、Tang H、Troyer DA、Mehta AS、Haab BB、Drake RR。(2014)福爾馬林固定石蠟包埋臨床組織塊和組織微陣列中 N-聚糖的 MALDI 成像質譜分析。公共科學圖書館一號。9(9):e106255

Powers, TW Holst, S., Wuhrer, M.,Mehta, AS, Drake, RR (2015)使用 MALDI 成像質譜法繪制肝細胞癌組織的二維 N-聚糖分布圖。生物分子，5，2554-2572。