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應用領域 | 醫療衛生,環保,生物產業 |
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Vimentin Chromobody 免疫檢測載體
Vimentin Chromobody 免疫檢測載體 Dnmt1 Chromobody
活細胞內的抗體檢測
波形蛋白是間充質細胞中主要的中間絲。此外,波形蛋白作為上皮間質轉化 (EMT) 的生物標志物具有重要作用。EMT 是一種高度動態的細胞過程,涉及轉移和癌癥的起始。波形蛋白在 EMT 誘導后上調,對細胞遷移和侵襲至關重要。
迄今為止,還沒有可用于在生理背景下研究內源性波形蛋白的方法。Vimentin 融合蛋白的過表達會誘導 EMT,因此會阻礙任何分析。現在,使用新的 Vimentin-Chromobody,您可以對活細胞中的內源性波形蛋白進行實時分析。Vimentin-Chromobody 使研究人員能夠研究波形蛋白中間絲的動態組織并研究 EMT。
使用 Vimentin-Chromobody 質粒,您可以獲得融合到 TagGFP (Evrogen) 的波形蛋白的羊駝抗體序列。轉化后,您的細胞會表達 Vimentin-Chromobody,并且通過結合熒光 Chromobody 可以看到波形蛋白絲。這種結合不會影響細胞活力或細胞運動性,因此為您提供了非侵入性監測細胞中波形蛋白細胞骨架的*可能性。
用 pVC-TagGFP2 質粒 (Vimentin Chromobody) 轉染的 MDCK 細胞。轉染后48小時固定細胞,細胞核用DAPI(藍色)染色。Vimentin-VHH-TagGFP 突出顯示轉染細胞中的波形蛋白中間絲(綠色)。
納米抗體是*的小抗體片段,可與靶蛋白非常有效地結合。在動物細胞中表達的納米抗體可以被收集并用于體外
研究。當納米抗體被表達為與 GFP 等報告分子的融合體時,發生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細胞內的目標結合。此外,使用正確的載體和啟動子,結合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質融合提供了一個非常好的替代方案,用于免疫定位研究。為什么?因為 GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變融合蛋白的活性。相比之下,
被稱為駱駝科的動物家族(駱駝、美洲駝和羊駝)產生沒有輕鏈的功能性抗體,即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過單個可變結構域識別并結合其抗原。當從它們的羧基尾部切下時,這些桶狀結構 (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內的親和力和亞納摩爾范圍內的解離常數(通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍)的特點。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達 70°C 的溫度下極為穩定,即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發揮作用。這些小而強大的抗體片段可用于各種*的應用。他們將打開您的研究可能性。
規格 | |
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部分# | VMBGFP,VCG |
向量類型 | 哺乳動物表達載體 |
目標分子 | 波形蛋白 |
記者 | TagGFP2(來自 Evrogen) |
宿主細胞 | 哺乳動物 |
轉染方法 | 通過任何已知的轉染方法轉染哺乳動物細胞。如果需要,可以使用 G418 [Gorman 1985] 選擇穩定的轉化子 |
在大腸桿菌中繁殖 | DH5alpha、HB101、XL1-Blue 和其他通用菌株 與 pMB1/ColE1 不兼容 |
選擇 | 原核生物——卡那霉素 真核生物——新霉素(G418) |
復制 | 原核生物——pUC ori 真核生物——SV40 ori |
采用 | 內源性細胞骨架或細胞核的無創活細胞可視化 |
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