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應用領域 | 醫療衛生,環保,生物產業 |
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Lamin Chromobody 免疫檢測載體
Lamin Chromobody 免疫檢測載體 核纖層蛋白體
活細胞內的抗體檢測
新的 Lamin Chromobody Immunodetection Vector 是細胞凋亡高內涵分析 (HCA) 的一項重大突破,因為其他分析
依賴于靜態終點分析。核層是包裹整個細胞核并支撐核膜的支架。它的功能是將核內容結合在一起并為核增加機械支持。
核層有助于保持結構剛性和形態變化之間的平衡。因此,人工摻入過表達和熒光標記的核纖
層蛋白通常會導致不希望的細胞毒性副作用。新的 Lamin Chromobody 克服了這種不需要的副作用。
Lamin Chromobody 的小尺寸產生了高信噪比,用于令人驚嘆的高分辨率圖像或核層動力學的延時電影。值得注意的
是,它對細胞功能沒有影響,并且對大多數細胞類型表現出極低的毒性。只需使用 Lamin Chromobody 質粒轉染您選
擇的細胞系。該質粒包含與 TagGFP2 (Evrogen) 融合的 Lamin 特異性羊駝抗體序列。轉化后,您的細胞將表達 Lamin
Chromobody。細胞核的外圍將發出強烈的環狀形式的熒光,因為熒光色體分子特異性地定位于椎板表面。這種瞬時結合
不會影響細胞活力或核相關過程,從而為您提供了一種*的可能性,可以在活細胞顯微鏡檢查期間監測核完整性和形態
,作為細胞健康和活力的指標。您還可以將 Lamin Chromobody 用作生物傳感器,用于實時檢測有絲分裂或細胞凋亡。
HeLa(左)和 U2OS(右)細胞穩定表達融合到 TagGFP2 的 Lamin Chromobody。經歷有絲分裂的細胞顯示出典型
的邊緣狀結構(G 期)、核層解聚(前中期)和有絲分裂結束時的重組(末期)。
使用融合到 TagGFP2 的 Lamin Chromobody Lamin Chromobody 對未經處理的細胞(左)和添加 5 µM 星形孢菌素 (STS)(右)進行延時成像。請注意在用 STS 處理細胞后在細胞凋亡過程中觀察到的特征性“爆炸"片段。
通過自動圖像采集和計算模式識別進行定量評估。以 15 分鐘的間隔監測椎板的形態變化(如用 Lamin Chromo
body 檢測的),如碎裂和囊泡形成。顯示了在 20 小時內用濃度增加的 STS (0-5 µM) 處理后凋亡細胞的百分比。
納米抗體是*的小抗體片段,可與靶蛋白非常有效地結合。在動物細胞中表達的納米抗體可以被收集并用于體外
研究。當納米抗體被表達為與 GFP 等報告分子的融合體時,發生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細胞內的目標結合。此外,使用正確的載體和啟動子,結合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質融合提供了一個非常好的替代方案,用于免疫定位研究。為什么?因為 GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變融合蛋白的活性。相比之下,
被稱為駱駝科的動物家族(駱駝、美洲駝和羊駝)產生沒有輕鏈的功能性抗體,即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過單個可變結構域識別并結合其抗原。當從它們的羧基尾部切下時,這些桶狀結構 (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內的親和力和亞納摩爾范圍內的解離常數(通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍)的特點。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達 70°C 的溫度下極為穩定,即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發揮作用。這些小而強大的抗體片段可用于各種*的應用。他們將打開您的研究可能性。
規格 | |
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零件號 | LCBGFP、lcg、lcr |
向量類型 | 編碼與綠色熒光蛋白 TagGFP2 融合的細胞周期標記物 Lamin-V H H的哺乳動物表達載體 |
目標分子 | 核層 |
記者 | TagGFP2(來自 Evrogen) |
宿主細胞 | 哺乳動物 |
轉染方法 | 通過任何已知的轉染方法轉染哺乳動物細胞。如果需要,可以使用 G418 [Gorman 1985] 選擇穩定的轉化子 |
在大腸桿菌中繁殖 | DH5alpha、HB101、XL1-Blue 和其他通用菌株
與 pMB1/ColE1 不兼容 |
選擇 | 原核生物——卡那霉素 真核生物——新霉素(G418) |
復制 | 原核生物——pUC ori 真核生物——SV40 ori |
采用 | 細胞周期期間核層的非侵入性活細胞可視化 |
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