一種可視化活細(xì)胞中 DNA 甲基化動態(tài)的非侵入性方法

用于檢測活細(xì)胞中 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶的新工具 Dnmt1 Chromobody Immunodetection Vector 可讓您實(shí)時(shí)監(jiān)測直接在

活細(xì)胞核內(nèi)參與活性甲基化的酶。DNA甲基化是高等生物正常發(fā)育和細(xì)胞分化的關(guān)鍵部分。這個(gè)過程穩(wěn)定地改變了細(xì)胞

中的基因表達(dá)模式。這些變化被細(xì)胞“記住"，并可能增加或減少基因表達(dá)。研究清楚地表明，主要的真核 DNA 甲基轉(zhuǎn)移

酶 Dnmt1 忠實(shí)地維持全基因組甲基化模式，并在表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮重要作用——在發(fā)育過程中控制基因表達(dá)和基因組

穩(wěn)定性。

Dnmt1 Chromobody 的小尺寸為令人驚嘆的高分辨率圖像或染色質(zhì)甲基化動力學(xué)的延時(shí)電影提供了高信噪比。值得注

意的是，它對甲基化模式?jīng)]有影響，并且對大多數(shù)細(xì)胞類型表現(xiàn)出極低的毒性。只需使用 Dnmt1 Chromobody 質(zhì)粒轉(zhuǎn)

染您選擇的細(xì)胞系。該質(zhì)粒包含與 TagRFP 或 TagGFP (Evrogen) 融合的 Dnmt1 特異性羊駝抗體序列。轉(zhuǎn)化后，您的細(xì)胞將表達(dá) Dnmt1 Chromobody。當(dāng)熒光 Chromobody 分子特異性定位于 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶時(shí)，細(xì)胞核會發(fā)出擴(kuò)散和點(diǎn)狀圖案的熒光。

細(xì)胞中 Dnmt1 染色體的實(shí)時(shí)可視化

HeLa 細(xì)胞用 Dnmt1-Chromobody 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，并在生長和分裂過程中觀察。細(xì)胞每 30 分鐘成像一次，持續(xù) 24 小時(shí)。

抗 Dnmt1-TagRFP Chromobody 將 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶與細(xì)胞核結(jié)合。在 G 期細(xì)胞中，信號通過細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均勻分

布。隨著時(shí)間的推移，在 S 期，顆粒以復(fù)制灶的形式出現(xiàn)在細(xì)胞核中，后顆粒消失，細(xì)胞分裂。

Dnmt1-Chromobody 在整個(gè)細(xì)胞周期中轉(zhuǎn)染 HeLa 細(xì)胞的靜止圖像。這一次，使用抗 Dnmt1-TagGFP 融合，復(fù)制灶

的形成可以看作是明亮的綠點(diǎn)，因?yàn)榧?xì)胞通過 S 期進(jìn)展。Dnmt1-Chromobody 不影響正常細(xì)胞功能。

染色體將你的細(xì)胞變成免疫報(bào)告工廠

納米抗體是*的小抗體片段，可與靶蛋白非常有效地結(jié)合。在動物細(xì)胞中表達(dá)的納米抗體可以被收集并用于體外研究

。當(dāng)納米抗體被表達(dá)為與 GFP 等報(bào)告分子的融合體時(shí)，發(fā)生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)結(jié)合。此外，使用正確的載體和啟動子，結(jié)合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質(zhì)融合提供了一個(gè)很好的替代方案，用于免疫定位研究。為什么？因?yàn)?GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變?nèi)诤系鞍椎幕钚浴Ｏ啾戎拢?/span>

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動物家族（駱駝、美洲駝和羊駝）產(chǎn)生沒有輕鏈的功能性抗體，即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域識別并結(jié)合其抗原。當(dāng)從它們的羧基尾部切下時(shí)，這些桶狀結(jié)構(gòu) (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結(jié)合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內(nèi)的親和力和亞納摩爾范圍內(nèi)的解離常數(shù)（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點(diǎn)。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達(dá) 70°C 的溫度下極為穩(wěn)定，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發(fā)揮作用。這些小而強(qiáng)大的抗體片段可用于各種*的應(yīng)用。他們將打開您的研究可能性。