傳統(tǒng)細胞計數(shù)和活力分析：細胞染色

傳統(tǒng)上，細胞計數(shù)和活力分析是通過對細胞進行染色來進行的。DAPI (4', 6-diamido-2-phenylindole) 和 Hoechst 是細胞計數(shù)常用的染色劑或染料。它們?nèi)旧罴毎退兰毎募毎瞬⒊尸F(xiàn) 藍色。  

細胞活力染色 的一個常見例子 包括：

用綠色染料 (Calcein AM)染色的活細胞和

帶有紅色染色的死細胞（碘化丙啶）

現(xiàn)在有一系列細胞活力染料可供選擇，包括用于死細胞的臺盼藍（藍色染料）和用于死細胞的赤蘚紅 B（粉紅色染料）。  

細胞染色問題：

• 耗時：  細胞染色的手動步驟。根據(jù)使用的細胞染色試劑盒或染料，完成細胞染色的樣品制備可能需要長達一小時。

• 染色劑會影響細胞功能： 添加染色劑本身會影響細胞功能。  

血細胞計數(shù)/血細胞計數(shù)

血細胞計數(shù)是計數(shù)室，它們已被細胞生物學(xué)家使用超過 100 年。盡管近引入了半自動化方法，例

如此處描述的方法（即圖像分析和流式細胞術(shù)）；血細胞計數(shù)仍然是全球許多細胞生物學(xué)實驗室的支柱。

但是基于血細胞計數(shù)的細胞計數(shù)反復(fù)出現(xiàn)的挑戰(zhàn)導(dǎo)致這些方法逐漸被替代。

血細胞計數(shù)細胞計數(shù)的挑戰(zhàn)：

• 人為錯誤：  手動計數(shù)意味著這在過程的多個階段是不可避免的，包括混合、處理和稀釋。  

• 耗時：  由于該過程的手動性質(zhì)，它不適合大規(guī)模分析或需要高通量細胞分析的過程。

• 重現(xiàn)性差：由于需要多次計數(shù)以確保一致性，因此通常會導(dǎo)致重現(xiàn)性差，尤其是在細胞樣本的

• 用戶

• 對用戶測試中。

• 材料變化：  由于這是一種 DIY 方法，每個研究人員將使用不同的緩沖液、不同的移液器，這些差異

• 可能會導(dǎo)致更多不必要的錯誤。

基于圖像的分析

隨著近年來計算機處理能力的提高，基于計算機的圖像流式細胞儀的興起也是如此。借助更強大的機器學(xué)習(xí)和圖像分析算法，計算機現(xiàn)在可以定量分析細胞圖像，檢測人眼可能無法檢測到的特征。依賴這種方法的儀器包括數(shù)碼相機（拍攝細胞圖像）和分析圖像的計算機程序。相機必須拍攝具有“細胞聚焦" 的高質(zhì)量圖像 - 高質(zhì)量的圖像更容易讓計算機算法進行分析。因此，這些設(shè)備通常 具有手動對焦或自動對焦設(shè)置 - 這在拍攝圖像之前確保細胞處于焦點位置。為了確保在相機前正確呈現(xiàn)細胞樣本，這些儀器通常使用儀器專用的專業(yè)載玻片或墨盒。

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