Cy5熒光標記抗體/蛋白試劑盒 (10~100 mg標記量)

一. 產品簡介

Cy5熒光標記抗體/蛋白試劑盒可以通過抗體/蛋白上的伯胺基團（如賴氨酸），簡單、快速地實現抗體/蛋白與Cy5熒光染料的共價偶聯。此為通用型試劑盒，適合Cy5熒光標記各種分子量不一致的抗體/蛋白。偶聯在30分鐘內即可完成，偶聯效率可達70%左右。使用超濾管純化，可快速去除多余的Cy5熒光染料，且不會損失抗體/蛋白。

二. 試劑盒組成與存儲

收到后將Cy5-mix(含10 % Cy5染料)儲存在-20?C。Coupling Reagent、Cy5-mix溶解液可在+4°C短期保存或-20°C長期保存。

三. 實驗步驟

1. 取待標記抗體/蛋白(1~10mg)，溶解于1 mL純水中，加入100 μL Coupling Reagent，混合均勻待用。

注：抗體/蛋白在1~10 mg內均用1mL純水溶解，并加入100 μL Coupling Reagent。超出此范圍，請按比例增減，如0.5 mg抗體/蛋白，建議使用0.5 mL純水溶解并加入50 μL Coupling Reagent。

(以下步驟按標記1 mg抗體/蛋白為例)

2. 根據熒光標記需求程度，稱取0.1 ~1 mg Cy5-mix固體加至第1步溶液，充分混合溶解。

注：(a) 若Cy5-mix用量超出1 mg，可能導致熒光標記過量，引起熒光部分淬滅;

(b) 若低于1 mg的Cy5-mix難以稱取，可先取1 mg Cy5-mix固體溶解于100 μL Cy5-mix溶解液，再按需取Cy5-mix溶液加至第1步溶液。由于Cy5-mix溶解后易分解，溶液須盡快使用且不可保存。

3. 室溫避光反應30 min，延長反應時間不影響偶聯效率。

4. 將反應液轉移至超濾管，10000rpm超濾5min，即可除去未反應的Cy5-mix，為提高純度，可加入純水重懸抗體/蛋白，重復超濾1~2次。

5. 使用純水或PBS將超濾管截留下的抗體/蛋白重懸，即得到Cy5熒光標記的抗體/蛋白溶液。

四. 注意事項

1. 熒光標記前抗體/蛋白中可能含有干擾組分，建議低于以下比例:

注：若以上干擾組分超出建議比例，可先通過超濾管或透析等方式除去干擾成分，再使用本試劑盒進行抗體/蛋白熒光標記。

2. 偶聯后的抗體/蛋白應避光保存。通常在4 ℃下可保存6~12個月。如需保存更長時間，可加入冷凍保護劑如50%甘油，在-20℃保存。