超高效液相色譜作為一種先進的分析技術(shù)，具有高分辨率、高靈敏度和高效率的特點，在各個領(lǐng)域中發(fā)揮著重要的作用。通過自動控制純?nèi)軇┗驖馊芤旱谋壤齺碓诰€配制所需要的流動相，極大地縮短了準(zhǔn)備實驗所需要的時間。它可讓您充分利用ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)四元混合能力的優(yōu)勢，同時還能管理所選流動相的理想pH和離子強度要求。
超高效液相色譜操作流程的詳細(xì)介紹：
1、樣品制備
樣本轉(zhuǎn)換：將固體樣本轉(zhuǎn)換為液體形式，簡化復(fù)雜混合物，去除干擾基質(zhì)，濃縮或稀釋。
處理方法：包括離心、過濾、蛋白沉淀、液-液萃取、固相萃取、免疫親和捕獲、蛋白質(zhì)消化和衍生化等多種方法。例如，過濾可以去除樣本中的顆粒，延長色譜柱的使用壽命。
2、流動相準(zhǔn)備
溶劑純化：使用的溶劑必須為色譜純，并經(jīng)過0.45μm膜過濾。緩沖鹽等可以是分析純或優(yōu)級純。
脫氣處理：溶劑及樣品使用前需超聲脫氣30分鐘，以避免氣泡影響分離效果。
3、系統(tǒng)設(shè)置
硬件檢查：確保色譜系統(tǒng)的各連接部位密封良好，無泄漏現(xiàn)象。檢查并維護泵、進樣器、色譜柱和檢測器等關(guān)鍵部件。
系統(tǒng)預(yù)熱：開啟設(shè)備，預(yù)熱并穩(wěn)定系統(tǒng)，以確保分析過程中溫度恒定。
4、方法開發(fā)
方法選擇：如果已有現(xiàn)成的分析方法，可以直接使用；如果沒有，需要通過篩選各種色譜柱和洗脫液條件來開發(fā)新方法。
優(yōu)化與驗證：對選定的方法進行優(yōu)化，并進行穩(wěn)健性測試和方法驗證，確保方法的可靠性和重現(xiàn)性。
5、數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)采集：通過檢測器測量從色譜柱洗脫的分析物信號，并利用色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)進行轉(zhuǎn)換，生成色譜圖。
結(jié)果分析：根據(jù)色譜圖的保留時間、峰面積等參數(shù)進行分析和定量，必要時進行標(biāo)準(zhǔn)曲線校正。
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