懸浮細(xì)胞大多胞體呈圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長(zhǎng)，容易大量繁殖。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)雖比貼壁細(xì)胞少了消化的步驟，但培養(yǎng)起來(lái)同樣不易。有碎片、形態(tài)改變、生長(zhǎng)速度慢、細(xì)胞貼壁……每一種異常都牽動(dòng)著我們的心。
因此本期細(xì)胞學(xué)堂整理了懸浮細(xì)胞收貨和培養(yǎng)過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題，并針對(duì)各個(gè)問(wèn)題列出解決辦法，帶你逐個(gè)擊破！
運(yùn)輸常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法
1
碎片多
處理方法：懸浮細(xì)胞受到運(yùn)輸或者其他因素導(dǎo)致細(xì)胞損傷時(shí)，容易產(chǎn)生細(xì)胞碎片，碎片可通過(guò)低速離心（800~1000rpm，3min）去除；低速離心同時(shí)也會(huì)丟失細(xì)胞，故細(xì)胞密度低的時(shí)候不適用，細(xì)胞密度低時(shí)應(yīng)正常轉(zhuǎn)速離心，保留細(xì)胞優(yōu)先。
2
細(xì)胞不圓/形態(tài)變了/聚團(tuán)
處理方法：懸浮細(xì)胞受到運(yùn)輸或者微環(huán)境變化影響時(shí)，可能出現(xiàn)變形，聚團(tuán)等現(xiàn)象，在使用正確培養(yǎng)基和操作都正確的情況下，一般繼續(xù)培養(yǎng)一周左右可以恢復(fù)原狀。
培養(yǎng)過(guò)程常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法
細(xì)胞不圓/形態(tài)變了/聚團(tuán)
處理方法如下：
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少量細(xì)胞聚團(tuán)、呈葡萄串狀，屬于正常現(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時(shí)，易出現(xiàn)這種情況。通過(guò)靜養(yǎng)（少操作，少觀察） 、補(bǔ)加血清（5%）等方式，讓細(xì)胞密度增高逐漸適應(yīng)環(huán)境后可以恢復(fù)正常；
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血清品牌會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如果一種不會(huì)聚團(tuán)的細(xì)胞，養(yǎng)出來(lái)全部聚團(tuán)，分散的細(xì)胞很少，這時(shí)候要考慮血清的影響。
細(xì)胞生長(zhǎng)慢或不生長(zhǎng)
處理方法：懸浮細(xì)胞有密度依賴性，在高密度下?tīng)顟B(tài)比較好，低密度時(shí)狀態(tài)較差，所以傳代比例要控制，細(xì)胞狀態(tài)不好時(shí)，傳代可以不用離心法，而是補(bǔ)液或者半換液的方式，以避免離心損失細(xì)胞。
細(xì)胞發(fā)生貼壁
處理方法如下：
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細(xì)胞培養(yǎng)瓶靜置時(shí)間太長(zhǎng)，細(xì)胞沉底后會(huì)出現(xiàn)少量貼壁現(xiàn)象，但這種貼壁非常松，吹一下或拍一下細(xì)胞就可以起來(lái)；此現(xiàn)象為正常現(xiàn)象，無(wú)需特殊處理。
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如果細(xì)胞貼的非常緊，形態(tài)已經(jīng)變成類似于上皮樣時(shí)，需考慮是否為細(xì)胞特性或者有其他因素刺激導(dǎo)致；
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日常操作避免染菌以及使用優(yōu)質(zhì)血清是預(yù)防懸浮細(xì)胞貼壁的有效方法。
培 養(yǎng) 小 貼 士
1
懸浮細(xì)胞常規(guī)推薦接種密度：3-5×105cell/mL，生長(zhǎng)到2×106cell/mL左右可繼續(xù)傳代；該密度建議為理論值，實(shí)際按照每個(gè)細(xì)胞特性有波動(dòng)；
2
培養(yǎng)懸浮細(xì)胞需要穩(wěn)定的生長(zhǎng)環(huán)境，少操作，少觀察，更有利于細(xì)胞生長(zhǎng)；
3
不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞頻繁吹散，等待密度高和狀態(tài)改善時(shí)，細(xì)胞會(huì)自行散開(kāi)；部分細(xì)胞聚團(tuán)生長(zhǎng)為特性，吹散不利于生長(zhǎng)，請(qǐng)注意查看相關(guān)培養(yǎng)說(shuō)明；
4
有些細(xì)胞本身就是聚團(tuán)生長(zhǎng)(NK92,NK92MI,JURKAT,H209,ATT20等)，有些細(xì)胞本身就形態(tài)不圓（H9等），為正常現(xiàn)象，無(wú)需特殊處理；
5
豎瓶培養(yǎng)可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，但由于拿出來(lái)觀察時(shí)都是橫瓶，觀察久了細(xì)胞會(huì)貼到底部，觀察完再次豎起來(lái)就會(huì)有細(xì)胞掛在瓶底部，而細(xì)胞沒(méi)有培養(yǎng)基滋潤(rùn)很快就會(huì)死掉并殘留在壁上，從而導(dǎo)致養(yǎng)著養(yǎng)著細(xì)胞越來(lái)越少，貼壁細(xì)胞越來(lái)越多；因此，在培養(yǎng)瓶豎置操作時(shí)需注意吹下培養(yǎng)瓶底部的細(xì)胞，避免細(xì)胞殘留。
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