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收到細胞后請先置于培養箱中穩定2 ~ 4h后再進行下一步處理，不建議放置培養箱過夜后處理；

將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管，1200rpm離心3min收集細胞；

去掉上清，用PBS重懸細胞（以手搖離心管的方式重懸，不要用移液槍吹），將細胞收集到一個離心管中，再次1200rpm離心3min；

去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重懸細胞（還是以手搖離心管的方式混勻，不要吹細胞）, 放入培養箱消化2min；

消化2min后，加入5mL完-全培養基混勻終止消化，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散，1200rpm離心3min；

去掉上清，加入6mL左右細胞相應的完-全培養基混勻，視細胞量決定是1:2傳代-還是1:3傳代（由于細胞運輸有損傷，首-次傳代建議比平時養密度稍高）；

顯微鏡下觀察細胞是否有分散成單顆現象，若有明顯很大的細胞團需要重復上述步驟二次消化；

第二天及時觀察細胞貼壁情況，若貼壁細胞量過多，造成細胞堆積，貼壁24h后再次傳代分瓶，若密度正常則繼續生長，不建議換液，貼壁48h后換液去掉不能貼壁的細胞。

細胞貼壁松散，操作時應輕拿輕放；

培養時可將培養瓶/皿進行包被；

PBS潤洗時動作應緩慢，避免沖走細胞；

細胞傳代第二天可能有輕微聚團現象，再長一天能長開，不建議傳代第二天換液，以免損失細胞。