植物RNA核酸免提取試劑盒（多糖多酚類）

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒采用專門針對多糖多酚類植物樣本開發(fā)的裂解液PP，在10分鐘內(nèi)完成植物葉片、根、莖、花蕊、種子等的裂解、提取和純化。提取對象包括棉花、馬鈴薯、鐵皮石斛等。整個提取無需使用蛋白酶K等酶類制劑。該配方中含有RNA保護劑，能夠抑制RNA降解、保護RNA完整，從而提高產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫構(gòu)建等。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

備注：第一次使用前，在洗滌液PWB中加入48mL無水乙醇，并標記“√"和時間，避免重復加入。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、1.5mL無RNase離心管、β-巰基乙醇、DNase I（2U/μL，或貨號QR0102）

使用方法

1. 20-100mg新鮮植物樣本經(jīng)過液氮研磨后，加入700μL裂解液PP和35μLβ-巰基乙醇，渦旋30秒。

2. 55℃孵育1分鐘。

備注：淀粉含量高的樣本直接進行步驟3。

3. 12,000rpm離心1分鐘，吸取500μL上清液。

4. 加入250μL無水乙醇，上下顛倒混勻。

5. 全部加入RNA吸附柱中，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液。

6. 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液PWA，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

7. 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液PWB，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

8. 重復步驟7一次。

9. 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。

10. 將RNA吸附柱放入新1.5mL無RNase離心管，加入30-50μL 洗脫液P，室溫放置1分鐘。 

11. 12,000rpm離心2分鐘，得到RNA溶液，-80℃保存。

注意事項

1. 務(wù)必在超凈臺中進行操作，常換手套，防止RNA降解。

2. 盡可能使用新鮮樣本進行RNA提取。

3. 使用無DNase無RNase的吸頭和離心管，防止RNA降解，常更換吸頭，防止交叉污染。

4. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液PP置于65℃水浴后再使用。

5. 根據(jù)后續(xù)試驗需求，請使用DNase I（貨號QR0102）進行基因組清除。

常見問題解析