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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
DH10Bac 菌株主要用于生產(chǎn)重組桿狀病毒分子（Bac-to-Bac 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)）。該菌株中含有父
本 bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124；其中， bMON14272 中包含 mini-F 復(fù)制子, 卡那抗
性基因, attTn7 位點(diǎn)和 lacZα 互補(bǔ)因子；而輔助質(zhì)粒 pMON7124 含有 tnsABCD 區(qū)，可表達(dá)轉(zhuǎn)座蛋白
來(lái)幫助把供體質(zhì)粒上的 mini-Tn7 插入到父本的 bacmid 上的靶標(biāo)位點(diǎn)。當(dāng) DH10Bac 感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化
了在多克隆位點(diǎn)克隆了外源片段的供體質(zhì)粒(如 pFastBac)時(shí)，該菌株可生成復(fù)合 bacmid。DH10Bac
菌株攜帶 ?80lacZΔM15 突變，因此可用于藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè)，DH10Bac 感
受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
DH10Bac
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL
nupG /pMON14272 / pMON7124
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化DNA加入到100 μL感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育30 min；
3. 將離心管置于42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激90s后，立刻置于冰浴中靜置2-3 min；
4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養(yǎng)基（室溫或37 ℃預(yù)熱），后置于37 ℃搖床復(fù)壯45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化DNA的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化DNA后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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