化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
Stbl2 菌株來源于大腸桿菌 JM109 菌株，適合于克隆含不穩(wěn)定序列（如正向重復(fù)序列、反向重復(fù)序
列、逆轉(zhuǎn)錄病毒的序列等）。另外，mcrA基因的突變和 mcrBC-hsdRMS-mrr基因缺失使得該菌株更
適于克隆甲基化的基因組序列；同時 Stbl2 也可用于慢病毒載體的構(gòu)建。該菌株中 recA1 和 endA1
的突變有利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞的平板生長優(yōu)條件
是 30 ℃。Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞中包含有 α 互補(bǔ)序列的質(zhì)粒，所以本宿主菌株不能被用于藍(lán)白斑篩選實(shí)
驗(yàn)；本菌株也不耐受 ccdB 毒性。經(jīng) pUC18 轉(zhuǎn)化檢測，Stbl2 感受態(tài)細(xì)胞的效率可達(dá) 107 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Stbl2 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：FendA1 glnV44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 Δ(lac-proAB) mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) λ-
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
產(chǎn)品特性
-屬于大腸桿菌 K 株系列，主要用于目標(biāo)基因的克隆和質(zhì)粒的保存；不可用于以 T7 RNA 聚合酶為
表達(dá)系統(tǒng)的蛋白表達(dá)；
-該菌株適合克隆不穩(wěn)定插入片段，甲基化的基因組序列，以及慢病毒載體的構(gòu)建。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90 s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養(yǎng)基（室溫或37 ℃預(yù)熱），然后置于37 ℃搖床復(fù)壯45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
化工儀器網(wǎng)