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是誰的PCR實驗又失敗了?

閱讀:216      發布時間:2023-10-13
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時間:周五下午
坐標:實驗室
認真點完96孔板的你,貼上封板膜,放入PCR儀,跑完4小時的程序后準備美美下班。看了一眼數據,再看一眼PCR板——
你(瞳孔地震):“師兄!跑完PCR,邊緣孔的液體體積怎么看起來少了?”

你師兄(仔細觀察):“把‘看起來’去掉。”


原來是因為

實驗室前輩們總結出了影響PCR的n大要素,反應步驟、引物設計……PCR板的選擇往往是最容易被忽視的,但同樣至關重要。


 

劃重點:PCR板的選擇,你避坑了嗎?


 

1. 污染源
從核酸提取開始到后續目的片段定向擴增,都要在無DNase與RNase、無PCR抑制劑的環境中進行,否則這些污染物會大大降低擴增效率。這是PCR耗材的基本要求,質量的關鍵取決于生產環境的潔凈度和工藝質控。

 

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2. 硬度
硬質框架PCR板比普通PCR板有更高的硬度,不會出現“翹邊”的現象,在貼膜的時候方便對每個孔“雨露均沾”,達到良好的密封性。

 

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3. 蒸發率
PCR實驗在小體系(微升級別)中反應,且程序包含溫度的循環升降,這些都容易造成體系蒸發的邊緣效應,影響產物濃度。因此PCR板需搭配高質量的封板膜,降低體系蒸發率,確保最終數據的可靠性。

 

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4小時PCR后的剩余體積 (初始體積-20ul)

 

4. 熒光轉化率
PCR孔壁經特殊設計的二氧化鈦著色工藝,能優化熒光定量PCR (qRCR) 反應的熒光信號反射效率,減少孔間信號交叉污染。相較于透明的PCR耗材,白色PCR板和PCR管的孔壁能更靈敏地反射熒光信號,優化實驗結果。

 

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特殊著色工藝的白色PCR耗材優化熒光信號結果

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  • 機械強度好,不翹邊,易貼膜。

  • 搭配封板膜使用,減少蒸發邊緣效應。

  • 白色PCR產品優化熒光反射,減少孔間信號交叉污染。

 

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