使用真空手套箱操作步驟如下：
打開包裝箱，首先檢查運輸過程中真空手套箱上的各結合部位有無松動。如有松動請將相應的螺絲擰緊，然后可以試抽真空。
（一）抽真空與充氣的放法：
1、 真空手套箱 分為主箱體和過渡室兩部分。主箱體不能單獨抽真空，過渡室則可以單獨抽真空。
2、先打開過渡室里面的門，然后關上所有手套接口壓蓋、閥門和過渡室外的門。
3、打開手套口之間的三通閥（逆時針旋轉），將手套接口壓蓋與手套之間的空間接通箱體，使得抽氣時手套內外（箱體和接口）同時抽真空，保持兩邊氣壓平衡。
4、將真空泵接到過渡室一個閥門上，開啟真空泵，緩緩打開此閥門，對系統抽氣（如打開閥門的速度太快，可能引起手套膨脹）。
5、待真空表指針下降并穩定在—0.1MPa以下時，抽真空完成，此時應先關閥門再關真空泵。
6、然后通過另一閥門向箱體內充入惰性氣體，直至氣壓比大氣壓（氣壓表指數為0MPa）略高一點，使箱體內、外的壓力基本平衡，且內部略高于外部，可保證大氣不會滲入箱體內部（如果您想使箱體內的氣體更純凈，將以上抽氣和充氣過程重復幾次）。關掉連接手套接口的三通閥，打開手套接口上的壓蓋，就可以進行操作了。
（二）將物件放入與取出主箱體的方法：
1、將物件放入主箱體的方法：當您完成上述“（一）抽真空與充氣”的操作后，如需要放物件放入主箱體，請先將過渡室的內門關上，打開過渡室的外門，將物件放入，然后關上外門，利用過渡室上的二個閥門進行抽氣和充氣。務必使主箱體和過渡室內的壓力與大氣壓基本平衡，才能打開里面的門，將將物拿進主箱體。
2、將主箱體內物件取出的方法： 先將物件放入過渡室，關緊過渡室內門。如過渡室內氣壓與大氣壓基本平衡，即可打開過渡室外門將物件取出。
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