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2. 色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。關于色譜柱的安裝、維護、保存以及由色譜柱導致的這樣那樣的色譜故障也是一門學問。
   

3. 加裝保護柱——保護柱的作用是過濾掉來自流動相和樣品的化學“拉圾"同時也可以有效除去流動相和樣品中的不溶物。盡管現在的色譜儀在流動相吸入口、進樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學污染,因此,加裝保護柱是必要的,特別是在分析中藥、中成藥等復雜混合物和生物樣品時更是保護分析柱的措施。保護柱填料應與分析柱一致,粒徑可較分析柱大。保護柱屬消耗品,經過一定次數的樣品分析(50～100次)后,出現柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時,應考慮更換保護柱。

4. 過濾流動相和樣品——流動相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成,原則上,所有經過色譜柱的流動相均應過濾,但在實際操作上應視具體情況而有所區別:當有機溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它超純水時,在能確保水和有機溶劑的質量且沒有受到污染時,過濾并無更多實際意義。當流動相中含有緩沖鹽時,則過濾是必要的,如前所述,當緩沖溶液放置一段時間(視環境溫度不同而異,夏季一般不超過48 h,冬季一般不超過一周)后,在使用前還應重新過濾。所配制的樣品試液在注入流路系統前均要經0. 45μm ( 0. 22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區分水系和油系,二者不可混用,以防止濾膜溶解而造成污染。裝流動相的容器和色譜系統中的在線濾器要定期清洗和更換,以避免濾器因過載而起不到過濾作用。

5. 凈化樣品——當樣品中含有對色譜柱有損害的化學成分,如產生性吸附的蛋白質、糖等有機分子和強吸附性物質,以及可能對柱填料產生破壞作用的基團離子。在進樣前應盡可能對樣品進行分離提純以除去多余雜質組分。

6. 避免高柱壓——雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達6000 p si (磅/平方英寸) ,但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命,避免的方法是：

   （1）柱壓過高時,盡可能采用較小的流速,以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。

   （2）當流速較大時,應采取流速梯度的辦法使流速分步到位。

   （3）使用手動進樣閥時,進樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報廢。當使用多柱聯用時,柱切換要避免在高壓下進行。

7. 注意溫度和酸堿度——一般以硅膠為基質的色譜柱最高使用溫度不超過60℃,以低于40℃為宜,特別是在流動相pH接近使用限度時,更應降低使用溫度。

   溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解,從而使填料性質改變,柱床塌陷,降低柱效,改變峰形。

   目前的鍵合硅膠色譜柱標示的pH適用范圍可達2～10,但在實際使用時應避的pH條件,特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用 ,如必須要在的pH條件下使用時,可通過以下方法避免柱損害:

   （1）在泵和進樣閥之間加裝預柱(飽和柱)來飽和流動相

   （2）降低使用溫度

   （3）檢驗完畢后立即用與所使用的流動相互相混溶的“溫和溶劑"*清洗

8. 正確及時的沖洗——開始試驗前,應了解柱中當前是何種溶劑。對于新色譜柱,如無特殊說明均為評價報告中所用流動相。柱中當前溶劑一定要與分析樣品所用流動相互溶,如不能混溶,要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。

9. 液相色譜儀使用操作規程總流程：

10. 　　超純水沖洗柱――流動相分離樣品――超純水沖洗柱――純乙睛保存柱

11. 　　1．電源準備

12. 　　打開穩壓器電源開關，須待電壓指示至220V后，才能開啟其他有關設備。

13. 　　2．LC-600高效液相色譜儀的準備

14. 
    

15. 　　乙腈(Fisher公司產品色譜純)

16. 　　超純水(Millipore超純水)

17. 　　冰乙酸

18. 　　溶液配置：貯液瓶與流動相的準備

19. 　　A液0.1%1ml，超純水999ml）室溫保存

20. 　　B液60%乙腈（乙腈600ml，超純水400ml）室溫保存

21. 　　樣品液0.01%乙酸（冰乙酸10l超純水100ml）室溫保存

22. 　　泵頭沖洗液：精濾后超純水或者是1%色譜純甲醇室溫保存

23. 　　注：貯液瓶應用超純水淌洗干凈，備用。

24. 　　流動相溶劑用潔凈G4玻沙漏斗精濾除去微小顆粒（目前未濾過溶液）。

25. 　　操作者必須清楚并注明A、B貯液瓶盛裝為何種溶劑。

26. 　　沖洗泵頭：用注射管于軟塑料管末端抽吸至有水流出，調節流速開關控制流速為20-30drop/min.（目前我們很少沖泵頭。）

27. 　　①流動相管道排氣

28. 　　如果，管道中氣泡較多，可通過彈擊管道，排除氣泡，并逆時針旋轉脫氣泵活塞使其松動，用注射管于流動相出口的塑料管末端抽吸至管道內氣泡排除*。操作時，我們通常已經打開了脫氣機（氣泡嚴重影響分離效果，所以觀察管道中液體是否有氣泡非常重要。）

29. 　　②開機

30. 　　③進入LC-600高效液相色譜儀操作系統

31. 　　④數據記錄的終止與保存

32. 　　3．關機

33. 　　1）N2000色譜工作站的關閉

34. 　　在N2000的主操作界面上分別單擊關閉泵、檢測器圖標，或通過菜單關閉。關閉電腦主機及顯示器。將所有使用儀器用布蓋好。關閉排氣扇、空調與穩壓器開關。

35. 　　2）清潔衛生

36. 　　實驗完畢后，打掃儀器室桌面與地面清潔，保持桌面整潔。

37. 　　3）儀器使用記錄

38. 　　記錄當天的儀器使用情況于記錄本上，包括儀器使用起止時間與出現問題的解決方案，并簽上操作者的名字.

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