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Biometra-Mastercycler nexus 家族:
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BiometraPCR儀 - 技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。
但是,DNA聚合酶在高溫時會失活,因此,每次循環都得加入新的DNA聚合酶,不僅操作煩瑣,而且價格昂貴,制約了PCR技術的應用和發展。發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床
1)內參照法:在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高 效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板
2)競爭法:選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高 效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數
3)PCR-ELISA法:利用生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的
2.內標在傳統定量中的作
由于傳統定量方法都是終點檢測,即PCR到達平臺期后進行檢測,而PCR經過對數期擴增到達平臺期時,檢測重現性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復實驗,所得結果有很大差異,因此無法直接從終點產物量推算出起始模板量。加入內標后,可部分消除終產物定量所造成的不準確性。但即使如此,傳統的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法
建立樣品準備
這個區域專門用作樣品的準備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時應該采取預防措施:⑴PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。⑵組織培養物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理,以根據應用的需要提取DNA或RNA。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。⑹管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生,而且管子不能用力崩開,這樣會產生氣溶膠。⑺任何時候都應該穿實驗服和帶手套,手套要經常更換,尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準備間,經常清洗
2、樣品準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機會。為了避免這一問題,反轉錄一步可以在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道
3、建立前PCR區
該去專門用于準備各種反應,這個區域必須保持干凈,而且沒有來自克隆和樣品準備的污染。前PCR區必須要有試劑和準備,特別是專門用于前PCR區的正壓活塞式移液管。
Biometra PCR儀售后服務承諾:
(1) 嚴格按維修程序及操作規程維修,確保維修質量。
(2) 嚴把配件質量關,杜絕偽劣配件的使用。
(3) 服務熱線24小時有人值班,24小時內做出回應。維修車間及前臺節假日和周六日不休息,保證用戶隨到隨修;建立上門維修制度;及時成立搶修小組,可隨時 到達現場搶修。
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(5) 外地顧客遠程故障判斷、技術故障解答、需要郵遞配件迅速辦理。外地客戶自行送修的我們會加急為您的機器排除故障,當天加急完成維修。
(6) 經我中心維修的機器一律實行保修,保修期為三個月,在保修期內如因維修質量或更換配件質量出現問題,我中心負責返修。
(7) 客戶在我中心維修過機器,可憑收費單據及保修單在我公司再次維修此機器時,享受維修費半價待遇。
(8) 建立回訪制度:定期對我公司維修過的機器使用情況以及我公司的服務質量情況進行跟蹤了解,向用戶調查滿意率、建立用戶滿意率調查表。
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