分享色譜柱柱活化沖洗的技巧
閱讀:959 發布時間:2020-11-23
色譜柱使用pH范圍在1.5~10.0,通常建議使用范圍pH為2.0~8.0比較合適,流動相超出pH范圍將會導致硅膠基質流失和鍵合相斷裂使柱效下降,使用壽命變短,所以要嚴格控制pH范圍。
新的色譜柱活化:采用100%甲醇1ml/min沖洗60min,再換成流動相進行平衡;如果流動相中含有緩沖鹽,在換成流動相前,請使用過渡流動相過渡后再換流動相平衡;
一、日常維護
1、建議檢測前樣品和流動相進行過濾;
2、建議每天做完樣品后及時進行清洗;
3、常規檢測
測試完后,直接把色譜柱反向連接采用90%有機相沖洗45min,后保存在純甲醇或純乙腈中;
4、使用緩沖鹽條件:
1)等度條件:使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min;
2)梯度條件:使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min;
注意:過渡流動相是指有機相和水相比例與分析流動相相同比例,只是不含有緩沖鹽;
3)緩沖鹽沖洗干凈后,采用90%有機相反向沖洗60min,后保存在純有機溶劑中;
注意:如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜;
二、色譜柱的保存
1.短時間內色譜柱的保存
如果使用時間間隔不超過四天,則色譜柱無需特別的維護,只需根據后一次測試使用的流動相或樣品的性質,在使用后用純甲醇、純水或甲醇與水的混合溶液進行淋洗,直至基線走平約半小時即可。
2.長時間色譜柱的保存
如色譜柱長時間不用,則將其從HPLC儀中取下保存,取下前用合適的溶劑淋洗,洗去不適與保存色譜柱的洗脫液,如C18反相柱可以用純甲醇或乙腈作為保存的介質,然后用塑料塞頭將其塞緊,以免色譜柱內*干燥。
新的色譜柱活化:采用100%甲醇1ml/min沖洗60min,再換成流動相進行平衡;如果流動相中含有緩沖鹽,在換成流動相前,請使用過渡流動相過渡后再換流動相平衡;
一、日常維護
1、建議檢測前樣品和流動相進行過濾;
2、建議每天做完樣品后及時進行清洗;
3、常規檢測
測試完后,直接把色譜柱反向連接采用90%有機相沖洗45min,后保存在純甲醇或純乙腈中;
4、使用緩沖鹽條件:
1)等度條件:使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min;
2)梯度條件:使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min;
注意:過渡流動相是指有機相和水相比例與分析流動相相同比例,只是不含有緩沖鹽;
3)緩沖鹽沖洗干凈后,采用90%有機相反向沖洗60min,后保存在純有機溶劑中;
注意:如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜;
二、色譜柱的保存
1.短時間內色譜柱的保存
如果使用時間間隔不超過四天,則色譜柱無需特別的維護,只需根據后一次測試使用的流動相或樣品的性質,在使用后用純甲醇、純水或甲醇與水的混合溶液進行淋洗,直至基線走平約半小時即可。
2.長時間色譜柱的保存
如色譜柱長時間不用,則將其從HPLC儀中取下保存,取下前用合適的溶劑淋洗,洗去不適與保存色譜柱的洗脫液,如C18反相柱可以用純甲醇或乙腈作為保存的介質,然后用塑料塞頭將其塞緊,以免色譜柱內*干燥。