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Bio-Rad酶標儀熒光分析技術(shù)是一種強大的分析手段，廣泛地應用在臨床檢驗、生物學研究、農(nóng)業(yè)科學、食品和環(huán)境科學中，是多功能酶標儀的重要應用，如TECAN(M1000、M200等)，Thmeral(Varioskan Flash)，Bio-tek（Synergy 4等），MD（M2、M5）都可以應用于熒光檢測。

Bio-Rad酶標儀概述；

室溫下，大多數(shù)分子處于基態(tài)的振動能級，處于基態(tài)的分子吸收能量（光能、化學能、電能或熱能）后躍遷至激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定，將很快衰變到基態(tài)，以光的形式放出能量，這種現(xiàn)象稱為“發(fā)光現(xiàn)象"。分子發(fā)光包括熒光，磷光，化學發(fā)光，生物發(fā)光等。受到光照時發(fā)光，光照切斷時發(fā)光立即消失的叫熒光，光照切斷時，發(fā)光逐漸變?nèi)跻灾孪У慕辛坠猓栈瘜W反應的化學能量而發(fā)光叫化學發(fā)光，由生物能轉(zhuǎn)變?yōu)楣廨椛涞姆Q作生物發(fā)光。

由于發(fā)光物質(zhì)不同熒光有分子熒光和原子熒光之分，分子熒光為帶光譜，原子熒光為線光譜，通常所說的熒光為分子熒光。通過測定所發(fā)射熒光的特性和強度，可以對物質(zhì)進行定性、定量分析。

Bio-Rad酶標儀熒光檢測技術(shù)；

1熒光強度

熒光強度與熒光物質(zhì)的濃度成正比，這是熒光分析法是量分析的依據(jù)。在生物學上的應用非常廣泛，可以進行生物大分子定量，酶活性分析，熒光免疫分析，細胞學分析（細胞增殖，細胞毒理，細胞吸附等）和分子間相互作用。

1.1細胞凋亡檢測

Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中Caspase-3為關鍵的執(zhí)行分子，它在凋亡信號傳導的許多途徑中發(fā)揮功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活，活化的Caspase-3由兩個大亞基（17KD）和兩個小 亞基（12KD）組成，裂解相應的胞漿胞核底物，最終導致細胞凋亡。但在細胞凋亡的晚期和死亡細胞，caspase-3的活性明顯下降。

設計出熒光物質(zhì)偶聯(lián)的短肽Z-DEVD-AMC。在共價偶聯(lián)時，AMC不能被激發(fā)熒光，短肽被水解后釋放出AMC，自由的AMC才能被激發(fā)發(fā)射熒光。根據(jù)釋放的AMC熒光強度的大小，可以測定 caspase-3的活性，從而反映Caspase-3被活化的程度。

1.2細胞毒性的檢測

體外細胞毒性研究對于檢測新的生物來源或人工合成的細胞毒素以及例行的臨床相關的檢測都有著重要的意義。細胞膜非滲透性的核染料 Propidium iodide能穿透損傷的細胞膜，熒光密度越高反映出其受損細胞越多。

1.3鈣流檢測

Fura-2、indo-1、Quin-2是Ca2+熒光指示劑，可以靈敏地反映細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化，當結(jié)合鈣離子時，最大激發(fā)波長會發(fā)生改變，發(fā)射熒光的強度和結(jié)合的Ca2+濃度有著定量的關系。

2.熒光偏振(FP)

1926年Perrin首先描述了熒光偏振理論，溶液中的熒光分子在受到偏振光照射時，可吸收并釋放出相應的偏振熒光，如果在激發(fā)時熒光物質(zhì)處于靜止狀態(tài)，發(fā)射光將保持原有激發(fā)光的偏振性，如果其處于運動狀態(tài)，發(fā)射光電偏振偏振平面將不同于原有激發(fā)光的偏振特性，這就是熒光偏振現(xiàn)象，熒光分子與其它因子的相互作用，例如相互結(jié)合或排斥；其所處環(huán)境的性質(zhì)，例如溶液的粘度、溫度等，這些因素都有可能對這個熒光因子受激發(fā)后發(fā)出的發(fā)射光的發(fā)射平面產(chǎn)生影響。因此以熒光偏振為基礎發(fā)展的技術(shù)可用來研究生命科學中分子之間的相互作用，如受體配體結(jié)合分析，DNA－蛋白質(zhì)結(jié)合分析，SNP分析，酶活性分析。熒光偏振分析所需的樣品量少，靈敏度高，可達亞納摩爾級范圍，重復性好，操作簡便，也更為安全可靠，不會在實驗過程中生成有害的放射性廢物，此外熒光偏振是真正均相的，允許實時檢測（動力學檢測），對于濃度變化不敏感，是均相檢測形式（中間不含洗滌步驟）的解決方案。