在液相色譜上遇到的問題有很多，例如HPLC 色譜柱的一些常見問題時有出現，可能會令很多實驗員感到非常沮喪。那么今天，恒譜生帶您了解這些是什么以及如何解決它們可以讓您避免數小時的挫敗感。
一、無峰值：
可能有多種因素會導致 HPLC 輸出中不出現峰或出現非常小的峰。正常讀數應該又大又細的峰值，高度也是會有不一樣的。小峰或沒峰可能代表檢測器燈已關閉，沒有流動相流量和樣品丟失或變質，或者檢測器、積分器、進樣器閥或記錄器這些有問題存在。
其實先要確保探測器是打開狀態，然后檢查所有連接情況。確保自動進樣器樣品瓶中有足夠的液體和樣品中無氣泡情況出現，并使用新的標液重新進行系統的檢查。
二、無流量：
如果沒有出峰，很有可能是HPLC 色譜柱中沒有流量；也可能意味著泵已關閉或流量因某種原因中斷或受阻；同時泵頭中也可能存在泄漏或空氣滯留。
如果泵關閉，需要啟動泵并檢查儲液器中的流動相液位和整個系統的流量情況。檢查樣品環是否有其他障礙物或氣塞，并確保流動相組分可混溶且流動相是否能夠進行正常脫氣。繼續檢查系統松動情況，檢查泵是否有泄漏等其他問題。
三、壓力問題：
要是壓力低于平常或無壓力這有可能是系統某處發生泄漏或空氣滯留；要是系統壓力過高，那么泵、進樣器、在線過濾器、保護柱、分析柱或管路都可能有問題。
如果是檢查發現是低壓，那就要檢查整個色譜系統是否存在泄漏、泵密封件故障或閥門損壞的情況等。如果是高壓的話，先從移除保護柱和分析柱，并用接頭替換，將進樣器重新連接到檢測器。以 2-5 mL/min 的速度運行泵，并開始查找原因，。如果問題是出現在分析柱上，請在分析柱與檢測器斷開連接時反轉，并沖洗色譜分析柱；在必要的時候更換入口濾芯或更換柱子。
四、裂峰：
如果發現峰出現在中間下降形成M形，那么可能是分析柱入口可能存在一些污染；也可能在色譜柱入口處有篩板被堵塞了或存在了不均勻的空隙；還有可能是樣品溶劑與流動相不相容。
如果是入口處有污染，請反轉并沖洗色譜柱，并在需要時更換篩板。還可以用具有相同鍵合相功能的薄膜顆粒重新填充色譜柱頂部，并繼續以反向流動方向使用色譜柱；如果是問題出在樣品上，請調整流動相中的樣品，因為樣品和流動相中的 pH 值差異會導致分峰。
五、尾峰和前峰：
發現峰不是直線上升和下降，而是開始在前面或后面就形成輕微的傾斜，則稱為前端或尾部。這通常可能是保護柱或分析柱受損或是色譜柱過載。如果有拖尾峰，請先移除保護柱并嘗試分析，必要時就需要更換。如果需要恢復或更換分析柱。一定要檢查流動相的組成和色譜柱的性能。有前峰的話，請嘗試注入更小的體積或稀釋樣品；如果溶劑有問題請調整溶劑，并使用 50 柱體積的 HPLC 級乙酸乙酯以標準流速的兩倍或三倍沖洗極性鍵合相柱，然后在開始分析之前使用中等極性溶劑。
今天恒譜生分享的知識先到這啦，希望對您的工作有所幫助！
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