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解讀微生物檢測中的CFU
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施啟樂(廣州)儀器有限公司
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在各種食品的微生物檢驗中,我們會看到標準中會涉及CFU/g或CFU/mL這些單位。
CFU:Colony-Forming Units(菌落形成單位)指單位體積中的細菌、霉菌、酵母等微生物的群落總數。在活菌培養計數時,由單個菌體或聚集成團的多個菌體在固體培養基上生長繁殖所形成的集落,稱為菌落形成單位,以其表達活菌的數量。
雖然微生物無處不在,但由于其個體極其微小,往往無法通過肉眼看到,必須借助高倍顯微鏡甚至染色后才能清楚觀察到。而菌落形成單位(CFU)則是通過分散、稀釋,最終由單個菌體或聚集成團的多個菌體在固體培養基上生長繁殖所形成的肉眼可見的菌落數來反推樣品中活菌數量的一種方式。這種方式得出的數據,并不是直接反映樣品中的微生物數量,而是一種認可的估算,所以要求操作者平板涂布或者接種之前把微生物活細胞分散均勻。但一些鏈球菌、球菌等天生就不能單細胞分散均勻。另外,考慮到各類樣品的微生物含量不一,為使CFU區間按照國標計算方法有效落在30-300之間,必須要保證合理的稀釋倍數,過多或者過少都不合適。
《食品安全國家標準》--食品微生物中描述如下:
6.3菌落計數
可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數器,記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位(colony-forming units,CFU)表示。
6.3.1選取菌落數在30CUF~300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30CFU的平板記錄具體菌落數,大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。
6.3.2其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一般,而其余一半中菌落分布有很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數。
6.3.3當平板上出現菌落間無明顯界限的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數。
CFU是一種估算方法,菌落形成單位的計量方式與一般的計數方式不同,一般直接在顯微鏡下計算菌體數量會將活與死的菌體全部算入,但是CFU只計算活的菌體數量,也就是說能夠在平板上生長出來的活的微生物才會形成CFU。理論上,分散均勻的情況下,一個活細胞形成1CFU。在實際操作中為了更好分散,很經常用到渦旋振蕩器進行混勻,但容易出現死菌。
同時,微生物最終能在平板培養基上形成菌落還與培養基類型、培養溫度及時間、接種方式、潛在微生物類型均有關系。所以,您會發現,高溫高濕天氣時,烘焙食品中更容易出現各類霉菌、細菌污染的質量問題。
總而言之,CFU是一種估算方法。當出現CFU時,就代表了已經選擇了這種估算方式,不同的單位也代表了過程的前后。
CFU的現實意義,舉例來說,若定量菌種的菌種數量標示的是“CFU",代表是用培養基法來計數的。若定量菌種是用流式細胞儀等其他方式計數,標示“個"更為合理。
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