SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒是一個完整的細胞裂解物系統,可直接根據培養細胞進行基因表達分析,而無需 RNA 純化步驟。SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 細胞裂解試劑提供了最高靈敏度的 Cells-to-CT Fast Advanced 逆轉錄酶混合物、2X RT 緩沖液和 PowerUp SYBR Green預混液。SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒可在現有最快的工作流程中為您提供您所需的靈敏度:在約1.5小時內從整個細胞板中獲得基因表達分析結果。
•全面—優化的工作流程包括移除 gDNA 的細胞裂解試劑、新型 Fast Advanced RT 酶混合物、緩沖液和新型 PowerUp SYBR Green Fast Advanced 預混液
•快速—7分鐘樣品制備,包括在室溫下進行 DNase處理
•簡便—可以在試管或直接在培養板中裂解樣品
•穩健—可以對每個樣品10–100,000個細胞進行基因表達分析;結果與從純化 RNA 中獲得的等效
•高效—含有足夠的試劑以從100起始樣品中生成1000實時熒光定量 PCR 結果
無需從培養細胞中分離 RNA 的方法
Cells-to-Ct 方法具有裂解試劑,可裂解細胞并保護 RNA。5在分鐘裂解步驟中同時去除 DNA,可節省時間并提高易用性。然后通過加入“終止液停止裂解,"該終止液會不可逆地與裂解試劑結合。
SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒含有用于 cDNA 合成的 Cells-to-Ct Fast Advanced 逆轉錄 (RT) 試劑和用于實時熒光定量 PCR 分析的 PowerUp SYBR Green預混液。引物對由用戶提供。
簡單7-分鐘的樣品制備
SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑10–盒專門設計用于100,000個培養細胞/樣品。細胞先用 PBS 清洗,再于室溫下置于裂解液中裂解5分鐘;同時進行 DNase 處理。裂解過程在加入終止液,室溫孵育 2 分鐘后終止。裂解液現可直接進行逆轉錄或在–20°C條件下短期儲存,或在-80C
條件下長期儲存。較高的檢測靈敏度
不同于某些將 RT 反應中裂解物的量限制在10%的競品試劑盒,SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒可以容納總 RT 反應體積45%的細胞溶解產物。此外,cDNA 至多可占實時熒光定量 PCR 反應體積的30%。在優化的 RT 反應中加入大量裂解物,以及后續使用 PowerUP SYBR Green 預混液進行實時熒光定量 PCR 反應的大量 cDNA ,可較大限度提高靈敏度。該預混液可精確而準確地對靶標進行擴增,從而能夠檢測少量靶標,如低表達水平的轉錄物。。
減少樣品損失和轉移錯誤
由于可直接在培養孔(96或384孔)中處理樣品,故樣品處理和樣品損失或轉移錯誤的可能性被降至較低,從而有益于快速、高通量的處理。與傳統的多步驟 RNA 分離方案不同,無需加熱、清洗或離心。該試劑盒大大簡化了耗時費力的30–60流程,將其縮短至7分鐘。
經過驗證的性能
SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒的所有組分均經過優化,具有一致性且可靠的性能。這樣可以消除參與不同樣品制備、RT 和實時熒光定量 PCR 試劑盒工作過程中的猜測,使您在現有的較快樣品至結果工作流程中獲得所需的靈敏度。
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