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NOVOCIB的細(xì)菌熒光素酶是從我們團隊從魷魚中分離的磷光桿菌菌株中純化出來的，并因其最亮的發(fā)光而被選擇。通過PCR擴增luxab基因并進行克隆。克隆的α和β亞基序列與發(fā)光桿菌的P24113和P12744蛋白（SwissProt Entry） 具有94%和92%的同一性。

應(yīng)用：在發(fā)光海洋光細(xì)菌中，光的產(chǎn)生是由兩個連續(xù)反應(yīng)產(chǎn)生的。第一個由 NAD(P)H-FMN 氧化還原酶 (EC 1.6.8.1) 催化，產(chǎn)生 FMNH ₂作為第二個反應(yīng)的底物，該反應(yīng)由熒光素酶 (EC 1.14.14.3) 催化，在脂肪醛和分子氧存在的情況下產(chǎn)生光。在 NADH 底物濃度有限的情況下，光強度與 NAD(P)H 濃度成正比。細(xì)菌熒光素酶與 FMN-NAD(P)H 氧化還原酶的偶聯(lián)已用于提供超靈敏的分析工具，用于定量 NAD(P)H 以及 NADH、NADPH 依賴性酶的底物（例如葡萄糖、乳酸、蘋果酸、乙醇、山梨醇、草酰乙酸）⁽¹⁾。

NOVOCIB的高純細(xì)菌熒光素酶可用于 NAD(P)H 定量或脫氫酶偶聯(lián)測定。

活性：在 10M NADH 和3.5mU /ml FMN 還原酶（參考 E-Nov-8）存在的情況下，使用 Optocomp 1 (Celsis) 測量，每秒每克蛋白質(zhì) > 500,000 (5.10 5 ) RLU ) 光度計。 純度：通過10% AA SDS-PAGE控制。

圖 1：使用高純細(xì)菌熒光素酶（50μg/ml，NovoCIB，E-Nov 10）獲得的 NADH 校準(zhǔn)曲線（雙對數(shù)圖） 。 測定條件：向含有0.1M KH 2 PO 4 pH=6.9、0.02%十二醛、50μM FMN、2mg/ml BSA的200μL孔中添加NADH（5μL）后測量發(fā)光信號（15秒） 。在 Optocomp 1 (Celsis) 光度計中跟蹤反應(yīng)。

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