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Anti-Clostridium difficile Toxin A (Chicken lgY)

艱難梭菌毒素/艱難梭菌是引致抗生素相關(guān)性腹瀉和偽膜性結(jié)腸炎的病原體。它產(chǎn)生兩種主要毒素，毒素 A 和毒素 B，毒素 A 和毒素 B 都通過(guò)氨酸殘基的葡萄糖基化使小 GTP 酶(如 Rho、 Rac 和 Cdc42)失活。這些 gTP 酶的抑制導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)的停止，從而導(dǎo)致細(xì)胞骨架解聚，某些應(yīng)激激活蛋白激酶的基因轉(zhuǎn)錄，磷脂酰肌醇4,5二磷酸的合成下降，以及細(xì)胞極性可能喪失。細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的喪失導(dǎo)致細(xì)胞舍入。一些艱難梭菌菌株也產(chǎn)生二元 ADP- 核糖基化毒素(CDT) ，修飾肌動(dòng)蛋白。來(lái)自艱難梭菌的毒素 a 毒素被稱為腸毒素，分子量為300kDa，等電點(diǎn) pl 為5.3。毒素 A 已被證明在上皮細(xì)胞表面碳水化合物上有結(jié)合位點(diǎn)，并引起白細(xì)胞介素8的誘導(dǎo)。李斯特提供的艱難梭菌毒素 A 是從天然菌株中高度純化的。產(chǎn)品 # 152艱難梭菌毒素 A 在 Tris 緩沖液中凍干。強(qiáng)烈建議測(cè)試一系列毒素濃度的細(xì)胞毒性，因?yàn)槊糠N細(xì)胞對(duì)毒素 A 的敏感性不同。來(lái)自艱難梭菌的毒素 B 毒素 B，稱為細(xì)胞毒素，分子量為270 kDa，pl 為4.1。在組織培養(yǎng)中，毒素 B 是一種對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞有效的細(xì)胞毒素，在細(xì)胞舍入測(cè)定中，毒素 B 的細(xì)胞毒性至少是毒素 A 的1000倍。毒素 B 可以阻斷5-羥色胺的釋放，并刺激磷脂酶 C 和 d 的產(chǎn)生。由于毒素 B 能夠影響細(xì)胞骨架的解聚，已經(jīng)證明它能夠抑制雙相肌肉收縮。毒素 B 具有高度的細(xì)胞毒性，對(duì)該毒素最敏感的檢測(cè)方法是上皮細(xì)胞毒性試驗(yàn)。以細(xì)胞為基礎(chǔ)的檢測(cè)對(duì)于確定住院病人腹瀉病的病因非常重要。這些毒素中和試驗(yàn)(TNA)與特異性抗體相當(dāng)精確。如果將特異性抗毒素 B 抗體與糞便樣品混合，保護(hù)細(xì)胞培養(yǎng)免受沒(méi)有該抗體的毒性作用，則確定患者體內(nèi)存在艱難梭菌毒素 B。名單實(shí)驗(yàn)室的雞肉抗 C。艱難毒素 B 抗體已被證明是有用的這些 TNA 細(xì)胞為基礎(chǔ)的測(cè)定。李斯特提供的艱難梭菌毒素 B 是從天然菌株中高度純化并作為液體提供的。產(chǎn)品 # 155L 艱難梭菌毒素 B，液體，在 Tris 緩沖溶液中提供。這種毒素溶液很容易使用，并且在某些應(yīng)用中更加方便。同樣，測(cè)試一系列毒素濃度的細(xì)胞毒性很重要，因?yàn)槊糠N細(xì)胞對(duì)毒素 B 的敏感性不同。類毒素/艱難梭菌毒素 a 和毒素 b 的類毒素都是由純化的毒素經(jīng)甲醛滅活而制成的。所有制劑都經(jīng)過(guò)細(xì)胞毒性測(cè)試，結(jié)果在每批貨物提供的 C-A 中。產(chǎn)品 # 153毒素 A 艱難梭菌類毒素在氨酸緩沖液中凍干。產(chǎn)品 # 154毒素 B 艱難梭菌類毒素在氨酸緩沖液中凍干。氨酸脫氫酶(cdgDH)氨酸脫氫酶(cdgDH)是艱難梭菌的天然菌株產(chǎn)生的主要抗原。對(duì)于感染早期的診斷，cdGDH 比毒素 A 或毒素 B 更容易被 ELISA 檢測(cè)到，并且是開(kāi)發(fā)檢測(cè)試劑盒的可行候選者。List Labs 還提供雞抗 cdGDH 抗體，產(chǎn)品 # 756。來(lái)自李斯特提供的艱難梭菌的氨酸脫氫酶是從本地菌株中高度純化并作為液體提供的。來(lái)自艱難梭菌的產(chǎn)品 # 159氨酸脫氫酶在 D-PBS 緩沖液中進(jìn)行凍干。抗體列表實(shí)驗(yàn)室提供了幾種針對(duì)艱難梭菌產(chǎn)物產(chǎn)生的抗體，包括針對(duì)艱難梭菌毒素 A 的山羊抗血清，以及針對(duì)艱難梭菌毒素 A 和毒素 B 的親和純化的雞 IgY。還提供了針對(duì)艱難梭菌 GDH 和艱難梭菌二元毒素 A 的親和純化的雞 IgY。反 C。艱難二元毒素 B 雞 IgY 既有物素化作用也有非物素化作用。二元毒素 B 亞單位的抗體可用于捕獲和檢測(cè)二元毒素。抗艱難梭菌產(chǎn)物的抗體可用于免疫印跡、 ELISA 和夾心 ELISA。這些產(chǎn)品可能適用于診斷，并對(duì)傳染病研究有相當(dāng)大的興趣。產(chǎn)品 # 752抗 C。艱難毒素 A 山羊抗血清作為凍干粉末提供。產(chǎn)品 # 753反 C。艱難毒素 A 親和純化的雞 IgY 作為液體在 PBS 緩沖液中提供。產(chǎn)品 # 754反 C。艱難毒素 B 親和純化的雞 IgY 作為液體在 PBS 緩沖液中提供。產(chǎn)品 # 756抗 C。難氨酸脫氫酶親和純化的雞 IgY 在 PBS 緩沖液中作為液體提供。產(chǎn)品 # 757反 C。艱難二元毒素 A 亞基親和純化的雞 IgY 作為液體在 PBS 緩沖液中提供。產(chǎn)品 # 758反 C。艱難二元毒素 B 亞基親和純化的雞 IgY 在 PBS 緩沖液中作為液體提供。產(chǎn)品 # 759反 C。艱難二元毒素 B 亞基雞 IgY，物素化，作為液體在 PBS 緩沖液中提供。

科學(xué)報(bào)告鑒定出 ADS024，一種具有直接殺死艱難梭菌和毒素降解生物活性的新特征菌株。 O’Donnell，MM; Hegarty，jW; Healy，b; Schulz，S; Walsh，CJ; Hill，c; Ross，RP; Rea，MC; Farquhar，R; Chesnel，L; 艱難梭菌感染(CDI)仍然是全球重大的健康威脅。艱難梭菌是一種機(jī)會(huì)性的毒性病原體，它利用腸道微生物群的紊亂生長(zhǎng)，產(chǎn)生從腹瀉到偽膜性結(jié)腸炎等癥狀和體征。用于治療艱難梭菌感染的抗生素通常是廣譜的，可以進(jìn)一步破壞共生腸道微生物群，使患者易于復(fù)發(fā)艱難梭菌感染。在抗生素治療完成后，繼續(xù)抑制艱難梭菌生長(zhǎng)的治療方案的需求日益增加。降解艱難梭菌毒素同時(shí)對(duì)腸道細(xì)菌的附帶影響最小的治療也需要防止復(fù)發(fā)。能夠產(chǎn)生一系列抗菌化合物、蛋白酶和其他生物活性代謝物的治療性細(xì)菌是在癥狀消退后預(yù)防 CDI 復(fù)發(fā)的潛在有力工具。在這里，我們描述了 ADS024(以前的 ART24)的鑒定和初始角色塑造，這是一種新的治療細(xì)菌，可以在體外殺死艱難梭菌，對(duì)其他共生細(xì)菌的影響有限。除了直接殺死艱難梭菌，ADS024還能產(chǎn)生能夠降解艱難梭菌毒素的蛋白酶，這種蛋白酶是與大多數(shù) CDI 病例相關(guān)的癥狀的驅(qū)動(dòng)因素。ADS024作為一種單菌株活性生物治療產(chǎn)品正在臨床開(kāi)發(fā)中，用于預(yù)防 CDI 復(fù)發(fā)，這個(gè)初始數(shù)據(jù)集支持進(jìn)一步的研究，旨在在未來(lái)的人類臨床試驗(yàn)中評(píng)估 ADS024。

CellTFPI 是來(lái)自強(qiáng)毒力進(jìn)化枝2艱難梭菌 J; Yang，Q; Zhang，X; Zhang，Y; Wan，L; Chan，X; Zhou，Y; He，L; Li，D; Jin，D; zen，Y; Huang，J; Li，Y; Tao，L; 強(qiáng)毒力進(jìn)化枝2艱難梭菌的出現(xiàn)與嚴(yán)重癥狀有關(guān)，占全球感染的 > 20% 。TcdB 是艱難梭菌的主要毒力因子，而進(jìn)化枝2菌株僅表達(dá)兩種使用不同于經(jīng)典 TcdB 的未知受體的 TcdB 變體(TcdB2和 TcdB4)。在這里，我們進(jìn)行了 CRISPR/Cas9篩選 TcdB4和鑒定組織因子途徑抑制劑(TFPI)作為其受體。使用低溫電鏡，我們確定了全長(zhǎng) TcdB4與 TFPI 的復(fù)雜結(jié)構(gòu)，為 TcdB 定義了一個(gè)共同的受體結(jié)合區(qū)域。該區(qū)域內(nèi)的殘基變異將主要的 TcdB 變異分為兩類: 一類識(shí)別卷曲(FZD) ，另一類識(shí)別 TFPI。TFPI 在腸腺中高度表達(dá)，重組 TFPI 對(duì)結(jié)腸上皮具有保護(hù)作用。這些發(fā)現(xiàn)確定了 TFPI 作為來(lái)自艱難進(jìn)化枝2 C 的 TcdB 的結(jié)腸隱窩受體，并揭示了 CDI 發(fā)病的新機(jī)制。

方法在使用下一代 DNA 測(cè)序的單結(jié)構(gòu)域抗體的分子生物學(xué)簡(jiǎn)易親和力成熟中，Lowden，MJ; van Faassen，H; Raphael，S; Ryan，S; Hussack，G; Henry，KA; 結(jié)合親和力是抗體功能的主要決定因素之一。在這里，我們提供了一個(gè)簡(jiǎn)單和快速親和力成熟的單結(jié)構(gòu)域抗體(sdAbs)使用串聯(lián)噬菌體展示選擇和下一代 DNA 測(cè)序的方案。使用隨機(jī)或位點(diǎn)飽和誘變使針對(duì)艱難梭菌毒素 A (A26.8)的模型駝科植物 sdAb 的序列多樣化，并克隆到基因3上游的噬菌體載體中。所得到的噬菌體展示的 sdAb 文庫(kù)對(duì)艱難梭菌毒素 A 進(jìn)行平移，并使用 Illumina MiSeq 測(cè)序?qū)ζ揭戚敵鲞M(jìn)行詢問(wèn)。通過(guò)生物信息學(xué)分析，我們能夠鑒定 sdAb 互補(bǔ)決定區(qū)域中的個(gè)體親和力增強(qiáng)氨基酸取代，當(dāng)結(jié)合時(shí)，導(dǎo)致親和力改善約10倍。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是不需要對(duì)單個(gè)克隆進(jìn)行廣泛的篩選和角色塑造，也不需要關(guān)于 sdAb 的機(jī)制的結(jié)構(gòu)信息: 抗原相互作用。

 

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