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穩定的細胞系開發

Cellutron 提供定制的高質量穩定細胞系服務，以優化生產您感興趣的蛋白質。基因到細胞服務包括基因合成、靶向載體構建、細胞培養、轉染、穩定細胞系的藥物選擇和轉基因表達的確認。憑借*的載體技術，Cellutron 能夠在多種細胞類型中產生穩定的細胞系，包括小鼠和人類干細胞以及 iPS 細胞。

穩定細胞系-G      穩定細胞系-R

 在熒光報告基因的初始轉導兩個月后，穩定轉染的小鼠胚胎干細胞表達 GFP 或 RFP。

親代細胞系：人和小鼠胚胎干細胞和 iPS、HEK293、CHO、BHK、NS0 細胞、H9C2 或細胞系。

穩定細胞系產生的過程和時間線：

1. 哺乳動物細胞表達載體的基因合成與構建           

進行優化的基因合成并將基因克隆到哺乳動物細胞表達載體中（1 周）

2. 轉基因表達分析      

用表達載體轉染親本細胞系并通過 RT-PCR/Western blot/ELISA 評估轉基因的表達（1 周）

3. 篩選穩定轉染子

對*級克隆進行穩定性篩選并評估最終細胞系的 10 次傳代。（約 4 周）

向客戶提供 2 瓶*級穩定克隆

請聯系客服索取申請表。

肌節 α 肌動蛋白的免疫細胞化學染色

 

心肌細胞在 60 mm 板中培養

用 1X PBS 沖洗細胞，在室溫下用 PBS 中的 3.7% 甲醛固定細胞 10 分鐘，然后在 70% ETOH 中 5 分鐘，用 PBS 中的 0.2% Triton-X 100 孵育 5 分鐘，然后用 1X PBS 洗滌細胞兩次5分鐘。

用 1ml 2% BSA 的 PBS 孵育細胞 30 分鐘。在板中加入針對肌節 α 肌動蛋白 (Sigma, Cat#: A2172) 的原代小鼠抗體 1 小時，室溫，O/N，4°C。

用 1X PBS 清洗細胞 3 次，每次 10 分鐘。

與 HRP 偶聯的二抗在室溫下針對小鼠孵育 1 小時

用 1X PBS 清洗細胞 3 次，每次 10 分鐘。

用 1 ml DAB 溶液孵育 10 分鐘。用 1X PBS 清洗。

*在您需要之前準備新鮮的 DAB（Sigma，Cat#：D8001）溶液：

* 在 37 C 下解凍 DAB 原液，直到不再渾濁。將 5ul 的 DAB 原液添加到 1ml 的 1X PBS 中。加入 1ul 的 30% H2O2 并充分混合。

在顯微鏡下檢查染色的細胞。

成人心肌細胞分離

成年大鼠/鼠

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