重組酶介導鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA），是一種恒溫核酸快速擴增技術。RAA是利用從細菌或真菌中獲得的重組酶在常溫下可與引物DNA緊密結合，形成重組酶/引物復合體，侵入RNA-cDNA雙鏈核酸模板，在侵入位點重組酶將雙鏈打開，同時單鏈結合蛋白結合到被重組酶打開的單鏈上，維持雙鏈模板處于開鏈狀態。重組酶/引物復合體開始對雙鏈進行掃描，當引物在模板上搜索到與之完(空)全匹配的互補序列時，重組酶/引物復合體解體，DNA聚合酶結合到引物的3’端，開始合成新鏈。合成的新鏈又可以作為模板，最終擴增產物以指數級增長，完成靶標基因的擴增，可用電泳法進行判讀。RAA凍干顆粒具有快速、靈敏度高以及特異性強等優點，反應組分已混合并冷凍干燥成核酸擴增試劑，操作簡便，易于保存。

檢測原理：

RAA凍干顆粒是基于重組酶介導鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA）技術開發的恒溫核酸擴增檢測試劑，在39～42℃恒溫條件下特異識別并擴增目標樣本的核酸片段，可配合電泳法進行檢測判斷。

產品用途：

RAA凍干顆粒可應用于核酸DNA 的快速擴增。

儲存及有效期：

本產品存儲于2~28℃、干燥、避光條件下，有效期為12 個月。

引物設計：

RAA核酸擴增技術對引物設計的要求與常規PCR引物設計有一定的區別。由兩條寡核苷酸組成一對引物，分別特異性識別一個核酸目標物的上下游核苷酸序列；引物長度在28-35 nt之間，序列中無回文序列、連續單堿基重復序列和內部二級結構區；引物Tm值不作為設計時主要考慮因素。建議在開展RAA（基礎型）擴增反應之前，先進行引物的篩選試驗，以便得到較高的檢測靈敏度。

探針設計建議方法：探針長度在46-52 nt之間，序列避免回文序列、內部二級結構和連續的重復堿基；探針的5’端用一種抗原標記物標記，通常為FAM基團或羧基熒光素；內部含有堿基核苷酸類似物替換核苷酸（例如四氫呋喃殘基THF-有時稱為'dSpacer'）；3’末端有聚合酶延伸阻斷基團（例如C3-spacer，磷酸基或雙脫氧核苷酸）。如下圖所示：

注意：在開始實驗前檢查探針5’端標記的基團與下游引物5’端標記的基團是否與所用的試紙條相匹配；建議在開展 RAA試紙條型擴增反應之前，先進行引物的篩選試驗，以便得到較高的檢測靈敏度。

產品說明：

1. 本產品是“Ready to Use"即用型 RAA凍干顆粒；含有除引物所有的反應要素，如重組酶、DNA 聚合酶、逆轉錄酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。

2. 試劑盒最(空)低檢測下限為 10-100copies/測試（依據引物篩選優化程度和檢測手段）。

3. RAA試劑，僅擴增DNA。

4. 基礎型試劑，適用于電泳法分析條帶。

適用儀器：

恒溫金屬浴、恒溫水浴鍋。

檢測步驟：

1. 核酸樣本提取：請參考傳統DNA 提取方法或其他同效商品化試劑盒提取DNA樣本。

2. 操作步驟

2.1 根據反應數量，按照反應體系配制含有水、上游引物(10 μM)、下游引物(10 μM)的 Mix，混合均勻后加入裝有核酸擴增試劑的檢測單元管中；

2.2 向檢測單元管中加入經步驟1處理得到的待測DNA樣本；

2.3 再向檢測單元管蓋上加入1.5~2.5 μL 的Mg2+，蓋上管蓋，上下顛倒 輕甩充分混勻5-6次，低速離心10 sec； （注：本步驟“是否充分混勻"將決定實驗結果的重復性）

2.4 將檢測單元管放入37~40℃ 恒溫金屬浴（或恒溫水浴鍋）中，孵育30min。

結果分析與判定：

可以根據瓊脂糖電泳、試紙條或熒光法判定實驗結果。

注意事項：

1. 試劑條檢測，推薦使用免開蓋的裝置進行試紙條檢測，避免氣溶膠污染。

2. 開始檢測前請仔細閱讀本說明書全文，并嚴格按照要求進行操作。

3.不同類型樣品所提取的核酸含量和純度有差異，可能導致擴增效率不同。

4.當實驗室環境、試劑、儀器或配件存在陽性物質（例如質粒、擴增產物等）污染，或樣本間存在交叉污染的情況時，會影響檢測結果準確性，出現假陽性結果。

5. 務必保證試劑保存、配制或運輸得當，否則可能導致試劑檢測性能下降，出現假陰性結果。

6. 陽性對照為質粒，適用于評價本試劑核酸擴增性能。

7. 請嚴格按照基因擴增實驗室的管理規范進行操作。 實驗結束后，檢測過程中所產生的廢棄物應按照相關規范進行處理。

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