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MP人類免疫缺陷病毒確證試劑（免疫印跡法）

1)原理wB是將HIV蛋白經SDS-PAGE，由于蛋白分子大小不同而分離開來，然后再把這些已分離的不同蛋白帶轉移到硝化纖維膜上，以后用不同的方式，包括非常敏感的免疫酶法，檢測HIV抗體。每一條硝化纖維膜上均含有經電泳分離過的HIV抗原。若有相應抗體就會與硝化纖維膜條上的抗原帶相結合。然后與抗人的IgG酶結合物反應。在底物作用下，硝化纖維膜條帶上呈現紫色，表示陽性反應。

2)基本檢測程序

(1)準備試劑：配制稀釋洗滌液、印跡緩沖液、工作酶結合溶液。 

(2)濕潤膜條：用鑷子從塑料管中小心取出所需的硝化纖維膜條，其中包括3條對照(強陽性、弱陽性、陰性對照各1條)，并且將有編號的膜面向上放入分析槽中，隨后加人2 ml已經稀釋好的洗液，室溫(22～28℃)振蕩浸泡至少5 min，然后吸干槽內液體。

(3)加樣：每槽中加入2 ml印跡緩沖液和20ul待檢標本或對照血清(每個標本都需換新的移液頭)。

(4)孵育：蓋上蓋子，室溫振蕩1 h(也可采用室溫振蕩16～18 h)。

(5)洗滌：小心打開蓋子，吸干槽內液體，避免標本交叉污染。加入2 ml已經稀釋的洗滌液，室溫浸泡振蕩5 min，再吸干槽內液體。如此反復洗滌3次。

(6)酶結合：加入2 ml工作酶結合溶液，蓋上蓋子，室溫振蕩1 h(如果在6步驟中采用室溫振蕩16～18 h的，則此步酶反應步驟中室溫振蕩30 min)。

(7)洗滌：吸干槽內液體，再洗滌3次。

(8)顯色：加入2 ml底物溶液，室溫振蕩15 min。

(9)終止：吸干槽內液體，加入蒸餾水終止反應，反復3次，隨后用鑷子小心取出膜片于濾紙巾上，并開始讀膜片結果。

(10)結果判定標準：每次實驗須設立對照血清，如陽性對照必須全部條譜帶均出現；弱陽性對照可以譜帶不全，但必須夠判定陽性的結果；陰性對照則無反應譜帶。如果對照血清的結果未出現正確的譜帶，則此次實驗無效，須重做。同時，每條膜片上有一血清條帶，此帶未出現說明有可能漏加標本；那么此條帶為無效實驗，也須重做。

(11)結果判定：陰性標本，在膜片上不出現有顏色的譜帶。陽性血清標本可在膜上呈現水平的深紫色譜帶。小分子量蛋白譜帶在膜片下端，高分子量的譜帶在膜片上端。譜帶顏色的深淺與血清中HIV抗體的濃度呈正比。典型的反應譜帶可參照標準圖譜判斷(試劑盒中備有)。

中國疾病預防控制中心2004：年版的《全國艾滋病檢測技術規范》WB檢測的判定標準如下。

HIV-1抗體陽性：至少有2條env帶(gp41和gpl60／gpl20)出現；

至少有1條env帶和P24帶同時出現。

HIV-1抗體陰性：無抗體特異帶出現。
HIV-1抗體不確定：出現HIV特異性抗體帶，但帶型不足以確認陽性的。

上述標準為判讀WB檢測結果的基本原則，在實際工作中還應參照所用試劑的說明綜合判斷，遇疑難情況應報上級實驗室解決。

如膜片上出現特異性HIV-2 gp36帶，則須進一步用檢測HIV-2抗體的WB藥盒進一步檢測。HIV-2抗體血清學陽性：至少有2條env帶(gp36和gpl40／gpl50)。HIV-2抗體陰性和HIV-2抗體不確定的判斷，類同于HIV-1的判斷。

MP人類免疫缺陷病毒確證試劑（免疫印跡法）