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產(chǎn)品名稱
PLC/PRF/5 人肝癌亞力山大細(xì)胞
（ Cat.No： XK-Y1421）
適用范圍
本產(chǎn)品*于科學(xué)研究， 絕不可
作為人類或者動物疾病的治療產(chǎn)品使
用。
*培養(yǎng)基配置
DMEM（ 高糖） +10%FBS+1% P/S
細(xì)胞圖片

產(chǎn)品描述
 

拆包
1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液， 如有， 請拍照并及時(shí)與技
術(shù)聯(lián)系。
2.請立即將細(xì)胞從包裝盒中取出， 并按照下方操作步驟進(jìn)行處理。
T25 培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞操作步驟
1. 75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況， 并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（ 40
× ,100× ,200× 各一張） 前三天照片為重要售后依據(jù)， 不提供或未
拍照默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
3. 不要打開培養(yǎng)瓶蓋， 將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時(shí)后
再做處理， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)
4. 貼壁細(xì)胞： 若細(xì)胞密度較小， 無菌操作， 去掉培養(yǎng)基。 每瓶添加
配制好的*培養(yǎng)基 5-6ml。 放到 37 度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 待細(xì)胞密度到
80%以上， 進(jìn)行傳代。
懸浮細(xì)胞： 將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基離心收集， 重懸計(jì)數(shù)根據(jù)密度進(jìn)行
分瓶， 密度在 3x10^5/ml 為宜。
注意： *次傳代比例建議 1:2， 之后可根據(jù)細(xì)胞密度和增
殖情況適當(dāng)調(diào)整。
凍存管細(xì)胞的操作步驟
1. 收到細(xì)胞后， 檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。 如有外包裝
破損干冰已*揮發(fā)等問題， 請即時(shí)聯(lián)系。
2. 將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至-80 度冰箱(不超過一周） 或液氮保存,建議盡早
復(fù)蘇。
3. 復(fù)蘇*管后有活性狀態(tài)問題及時(shí)與我們聯(lián)系， 會有技術(shù)人員與
您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管。
注意： 為保證細(xì)胞的高存活率， 收到產(chǎn)品后， 請立即解凍
復(fù)蘇細(xì)胞。

細(xì)胞傳代
1. 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)， 棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)
液， 用 PBS 清洗細(xì)胞一次；
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中， 倒置顯微鏡下觀
察， 待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml *培養(yǎng)液終止消化， 再輕輕吹打
細(xì)胞使之脫落， 然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中， 1000rpm 離心
5min；
3. 棄上清， 沉淀細(xì)胞用 1-2ml *培養(yǎng)基重懸， 然后按 1:2 比例進(jìn)
行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ， 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞復(fù)蘇
1. 從液氮中取出細(xì)胞凍存管（ 注意： 佩戴防爆管面具） ， 快速將其
置入 37℃ 水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶， 然后用 75%的酒精擦
拭凍存管外壁；
2. 將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml *培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，
1000rpm 離心 5min；
3. 棄上清， 沉淀用 6ml *培養(yǎng)基重懸， 接種 25cm2培養(yǎng)瓶， 于 37℃ ，
5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1. 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)， 棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)
液， 用 PBS 清洗細(xì)胞一次；
2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中， 倒置顯微鏡下觀
察， 待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化， 輕輕吹打細(xì)胞使
之脫落， 然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；
3. 用適量的凍存液（ FBS： DMSO=9 ： 1） 重懸細(xì)胞， 并放置于凍
存管中；
4. 先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h， 然后將其移入-80℃ 過夜， 24h
后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。 使用程序降溫盒可直接放入-80℃ 。