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甲型流感病毒（IAV）核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品
甲型流感病毒（IAV）核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品
【產品名稱】
商品名稱：甲型流感病毒（IAV）核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)新品
Name ：Avian Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規格】50T/盒
【預期用途】
甲型流感是由甲型流感病毒(AIV)引起的一種禽類傳染病，雞、火雞、鴨和鵪鶉等家禽均可感染，發病情況
差別較大，有的出現急性死亡，有的無癥狀帶毒。水禽是 AIV 的自然宿主，也是流感病毒的天然基因庫，幾乎
所有亞型的流感病毒都可以在水禽中分離到[1]。在世界范圍內，家禽中流行的主要有 H5、H6、H7、H9 等亞型。
H5 和 H7 亞型的某些毒株可以造成禽類很高的發病率和死亡率，被稱為高致病性甲型流感(HPAI)病毒。OIE 將
高致病性甲型流感列為 A 類動物疫病，我國也將其列為一類動物疫病[2-3]。
本試劑盒利用實時熒光 PCR 原理，檢測甲型流感病毒，對甲型流感診斷有重要指導意義。
【檢驗原理】
本試劑盒針對甲型流感病毒 M 基因高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含甲型流感病毒基
因組模板的情況下，PCR 反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對 PCR 過程中相應通道的信號強度進行實時
監測和輸出，實現檢測結果的定性、定量分析。
【試劑組成】
注：1）不同批號試劑不能混用。
2）試劑盒內各試劑組份足夠包裝規格所標示的檢測次數。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過5 次，有效期12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測儀。
【標本采集】
病死或撲殺動物，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活動物，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄
物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，
嚴禁反復凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1 樣本前處理
每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生
理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離
心管中；棉拭子直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2 核酸提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提
取，請按照試劑說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR 反應管管數為N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數
每滿10 份，多配制1 份)，每測試反應體系配制如下表：
將混合好的測試反應液分裝到PCR 反應管中，21uL/管。
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，
短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR 儀反應槽內；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL；熒光通道選擇：
檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇ROX 參比熒光，
選擇None 即可。
4.3 推薦循環參數設置：
5. 結果分析判定
5.1 結果分析條件設定
設置Baseline 和Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像
調節Baseline 的start 值(一般可在3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在5~20 范圍內調節)，以及Threshold 的
Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
5.2 結果判斷
陽性：檢測通道Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；
可疑：檢測通道35<Ct 值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為35<Ct 值≤38，且曲線有明顯的增長曲線，
判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結果Ct 值>38 或無Ct 值。
6. 質控標準
陰性質控品：Ct>38 或無Ct 值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且Ct 值≤32；以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
7.檢測方法的局限性
1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
3.陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；
7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1.所有操作嚴格按照說明書進行；
2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，混勻并短暫離心；
3.反應液應避光保存；
4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。
【參考文獻】
[1] Webster R G, Bean W J, Gorman O T, et al. Evolution and ecology of influenza A viruses [J]. Microbiological
Reviews, 1992, 56(1): 152-179.
[2] Shortridge K. Avian influenza A viruses of southern China and Hong Kong: ecological aspects and implications for
man [J]. Bulletin of the World Health Organization, 1982, 60(1): 129.
[3] 張燁, 舒躍龍. 2004–2012 年我國甲型流感流行情況 [J]. 中華實驗和臨床病毒學雜志, 2013, 27(3): 239-240.【生
產企業】
企業名稱：上海晅科生物科技有限公司