您好, 歡迎來到化工儀器網
6我司提供的豬Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELI
新聞排行榜
更多產品展示
更多-
-
我司提供的豬層連蛋白/板層素(LN)EL
-
我司提供的豬白介素-5(IL-5)ELI
-
我司提供的豬孕激素/孕酮(PROG)EL
-
我司提供的豬流感病毒A(FLU A)EL
-
我司提供的豬松弛肽/松弛素(RLN)EL
布魯氏桿菌（Brucella）熒光PCR試劑盒說明書
-
提供商
上海晅科生物科技有限公司
-
資料大小
20.7KB
- 資料圖片
-
下載次數
0次
-
資料類型
WORD 文檔
-
瀏覽次數
21次
【產品名稱】
商品名稱：布魯氏桿菌（Brucella）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）
Name：Brucella Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規格】25T/盒、50T/盒
【預期用途】
布魯氏桿菌病是由布魯氏桿菌屬（Brucella）引起的全-世界范圍內流行的人畜共患病。布魯氏桿菌可感染多種家畜和野生動物，同時也可感染人，特別是羊布魯氏桿菌對人的威脅最大，引起相似的臨床癥狀和病理損傷， 如不孕-不育、流產、關節炎、睪丸炎及各種組織的局部病灶等，導致巨大的經濟損失和嚴重的公共衛生問題[1]。
本試劑盒適用于檢測羊種、牛種、豬種和犬種血液、動物組織或土壤、物體表面等標本中的布魯氏桿菌，
用于布魯氏桿菌感染的輔助診斷。
【檢驗原理】
本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對布魯氏桿菌特異性引物，結合一條特異性探針， 用熒光 PCR 技術對布氏桿菌的 DNA 進行體外擴增檢測，用于科研實驗中對可疑感染病料的病原學檢測。
【試劑組成】
包裝規格25T/盒50T/盒
Brucella 反應液500μL×1 管500μL×2 管
酶液25μL×1 管50μL×1 管
Brucella 陽性質控品250μL ×1 管250μL ×1 管
陰性質控品250μL ×1 管250μL ×1 管
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次，有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】
血液標本：抽取動物靜脈血 3 mL~5 mL 放入帶蓋的 EDTA 抗凝管中并做好標記送檢。
動物組織標本：無菌操作取動物的肝、脾組織 2 g~5 g，放入無菌容器中，并標記取樣日期及部位。土壤或粉末狀標本：無菌操作用采樣勺取 2 g~5 g 標本置于無菌容器中密封保存。
物體表面標本：采用無菌生理鹽水濕潤的無菌拭子擦拭物體表面(以 100 cm2 為宜)，放入無菌容器中保存。
【保存和運輸】
上述標本在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。
【使用方法】
1.樣品處理（樣本處理區）
1.1樣本前處理
血液標本：無需前處理，可直接用于 DNA 提取。
動物組織標本取 0.25 g 標本,加人 0.5 mL 無菌生理水，勻漿，靜置 10 min,取上清液備用。
土壤或粉末狀標本：取 0.25 g 標本，加入 0.5 mL 無菌生理鹽水，振蕩搖勻，靜置 10 min，取上清液備用。
物體表面標本：采集的標本用 0.5 mL 無菌生理鹽水洗滌，振蕩搖勻，靜置 10 min，取上清液備用。
1.2核酸提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的核酸提取試劑（離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書 進行操作。
2.試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿
10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑Brucella 反應液酶液
用量19μL1μL
將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。
3.加樣（樣本處理區）
將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。
4.PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇
ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
4.3推薦循環參數設置：
步驟循環數溫度時間收集熒光信號
11 cycle95℃2min否
245 cycles95℃15sec否
60℃30sec是
5.結果分析判定
5.1結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例）
反應結束后自動保存結果，根據分析后圖像調節 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據實際情況自行調整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數期，陰性質控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結果。
5.2結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數增長曲線； 陰性：樣本檢測結果無 Ct 值，且無特異性擴增曲線；
可疑：樣本檢測結果 40＜Ct 值≤45，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 40<Ct 值≤45，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性。
5.3質控標準
陰性質控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
6.檢測方法的局限性
1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
3.陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；
7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1.所有操作嚴格按照說明書進行；
2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；
3.反應液應避光保存；
4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。
【參考文獻】
[1]王利清. 布氏桿菌病的診斷及防控[J]. 農業技術與裝備, 2011.
[2]國家質量監督檢驗檢疫總局. SN/T 1088-2010 布氏桿菌檢疫技術規范[S]. 北京:中國標準出版社, 2010.
[3]GB/T 18646-2018, 動物布魯氏菌病診斷技術[S].