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細(xì)胞合成培養(yǎng)基的配制步驟及注意事項(xiàng)
雖然各種培養(yǎng)基的組成各有不同，但商品化的干粉型培養(yǎng)基的配制方法大同小異。絕大多數(shù)合成培養(yǎng)基的生產(chǎn)都已標(biāo)準(zhǔn)化、商品化，較為常用的培養(yǎng)基可在市場(chǎng)上購(gòu)得。這種干粉型培養(yǎng)基性質(zhì)穩(wěn)定，便于儲(chǔ)存、運(yùn)輸，價(jià)格便宜，為使用和配制合成培養(yǎng)基帶來(lái)很大方便。特殊需求也多可在現(xiàn)有合成培養(yǎng)基基礎(chǔ)上補(bǔ)加或調(diào)整某些成分予以滿(mǎn)足。以往實(shí)驗(yàn)室自購(gòu)各個(gè)組分，稱(chēng)量后再按一定順序進(jìn)行溶解配制的老方法，一方面需購(gòu)置大量各種各樣的成分，而且每種成分用量很少，很難控制和統(tǒng)一；另一方面要精確稱(chēng)量，順序溶解，步驟繁瑣，質(zhì)量難以保證。因此，自行配制培養(yǎng)基的方法除了因需要而專(zhuān)門(mén)配制一些特殊培養(yǎng)基外，大部分已不再使用。
1.配制用品
濾器、微孔濾膜、磁力攪拌器、O2、天平、燒杯、量筒、貯液瓶、瓶塞、注射器、pH計(jì)、NaHCO3、培養(yǎng)基、三蒸水、胎牛（小牛）血清、NaOH、HCI、青霉素、鏈霉素。
2.配制步驟
①將干粉型培養(yǎng)基溶于欲配制液體總量2/3的三蒸水，沖洗包裝袋兩次倒入培養(yǎng)液中，加人磁性攪棒并置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?，以確保培養(yǎng)基干粉充分溶解。
②按照產(chǎn)品包裝說(shuō)明的要求和實(shí)驗(yàn)需要補(bǔ)加NaHCO3和谷氨酰胺。
③加入抗生素：最終濃度為青霉素100U/mL，鏈霉素100ug/mL。（一般市售的青霉素為80萬(wàn)單位/瓶，將其溶解于4mL三蒸水中，每升培養(yǎng)液中加人0.5mL；市售鏈霉素為1g/瓶，將其溶解在5mL中，每升培養(yǎng)液加人0.5mL。）
④加入所需濃度的經(jīng)56℃水浴滅活的胎牛（或其他）血清，補(bǔ)加三蒸水至最終體積。（目前，血清均經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理。）
⑤調(diào)整培養(yǎng)液pH值：一般情況下市售干粉型培養(yǎng)基溶解后，pH值都有一相對(duì)穩(wěn)定的數(shù)值，但某些因素例如配制液體使用的三蒸水、加人不同濃度的血清、采用CO2加壓過(guò)濾等，有可能使所配制液體的pH有所改變。因此，配制過(guò)程中，應(yīng)強(qiáng)調(diào)采用新鮮制備的三蒸水并在加人血清后調(diào)整pH值，過(guò)濾除菌時(shí)宜采用O2加壓過(guò)濾。常規(guī)配制培養(yǎng)液時(shí)pH值常略偏堿，可采用HCI溶液進(jìn)行調(diào)整，使用時(shí)可將預(yù)先配制的HCI溶液逐滴緩慢加入欲調(diào)整的偏堿的液體中并攪拌均勻，用pH計(jì)或pH精密試紙觀察調(diào)整結(jié)果達(dá)到pH7.2~7.4。
⑥將上述溶液用過(guò)濾法消毒除菌。所使用的濾器采用0.22um和0.45um濾膜各1張，常規(guī)高壓滅菌消毒。
⑦將經(jīng)過(guò)濾除菌的培養(yǎng)液分裝于貼有標(biāo)簽的無(wú)菌貯液瓶中，加蓋瓶塞，加封75%乙醇浸泡的玻璃紙，4℃存放。
3.注意事項(xiàng)
①配制培養(yǎng)液以及調(diào)節(jié)培養(yǎng)液pH值所使用的HCl和NaOH等溶液需新鮮制備的三蒸水，一般于配制當(dāng)天制備，以保證水的純度和質(zhì)量。
②配制培養(yǎng)基的各種器皿都應(yīng)*清洗，烤干后備用。
③培養(yǎng)液配制過(guò)程中一般不需加熱助溶。
④培養(yǎng)液配制后應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)，以檢測(cè)培養(yǎng)液是否有污染。配制培養(yǎng)液所需血清的質(zhì)量應(yīng)保持穩(wěn)定，同一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)應(yīng)盡可能采用同一批號(hào)血清。
⑤每批次配制液體數(shù)量以使用2周左右為宜，以免時(shí)間過(guò)長(zhǎng)造成營(yíng)養(yǎng)成分損失。