TTC染色液是TTC和活細胞線粒體內的琥珀酸脫氫酶反應,生成紅色的甲臜,用來表示細胞的活力。配制多為2%,染色要避光,37度條件下,它是評價腦缺血損傷常用的指標。
TTC染色液技術指標:
1 原理:TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復合物,1894年*合成用來檢測種子的生存能力,1958年開始用來染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結構酶系統的質子受體,與正常組織中的脫氫酶反應而呈紅色,而缺血組織內脫氫酶活性下降,不能反應,故不會產生變化呈蒼白。
2 取腦:可麻醉后直接取腦或經生理鹽水灌注后取腦。因為腦組織未用多聚甲醛固定,所以較軟,取腦時更應仔細,保持大腦的完整性。
3 -20度冰箱中速凍20分鐘左右,便于切片。
4 切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。一刀在腦前極與視交叉連線中點處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。(參考:張均田,主編.現代藥理試驗方法)。如果需計算面積的話,應切得均勻或用專門的腦槽。
5 將切片置于TTC中,常規濃度為2%,也有用1%或更低濃度的。
6 用錫箔紙蓋住后,放入37C溫箱15~30min,不時翻動腦片,使均勻接觸到染色液。也可以用將腦片放入多孔板,再滴入TTC,覆以圓形蓋玻片使均勻染色。
7 染色后效果:為皮層下梗死。
毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專注于生物科技前沿技術研發和科研技術服務的公司,公司建有專業的分子生物學、細胞生物學、組織病理學實驗室,為眾多生物醫藥企業、科研機構、醫院及高校提供分子生物學、細胞生物學、病理形態學等方面科研服務。公司核心團隊曾在國內外許多優秀學府從事過多年研發工作,秉承“為客戶創造價值,為員工實現夢想,為社會創造財富"的經營理念,堅持以技術創新為先導,以服務質量為根本,為中國生物醫藥和科學研究提供優質的產品和技術服務。