詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)elisa方法,在微孔板包被有右旋糖酐偶聯(lián)抗原,加入右旋糖酐標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離右旋糖酐與微孔條上預(yù)包被的右旋糖酐偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗右旋糖酐抗體酶標(biāo)記物,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中右旋糖酐含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中右旋糖酐的含量。
技術(shù)交流:
樣品收集、處理及保存 | 操作步驟 |
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。 2. 細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104 -106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測(cè)。 3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測(cè)。 4. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上 清。 5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。 6. 組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測(cè)。 7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 8. 保存:如果樣品不能立即檢測(cè),應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 | 1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。 5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 7.溫育:操作同3。 8.洗滌:操作同5。 9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。 10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 |
客戶須知:
1、液體類標(biāo)本(細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、血清、血漿、尿液、胸水、腹水、腦脊液等)。
2、樣本保存:請(qǐng)盡早檢測(cè),2-8℃保存一天;需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集樣本,請(qǐng)將樣本及時(shí)分裝標(biāo)號(hào)后,置-20℃或-70℃保存;
3、請(qǐng)?zhí)崆案嬖V我們:您樣本的種屬、樣本數(shù)量、待測(cè)指標(biāo)及其他特殊要求。
承諾:
1.有質(zhì)量問題免費(fèi)包換,合同上注明了的.(質(zhì)量問題包括運(yùn)輸不當(dāng),客戶在使用過程中測(cè)不出結(jié)果,等等!)
2.全程技術(shù)指導(dǎo)。(包括售前的標(biāo)本收集,使用過程中不明白的地方,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的數(shù)據(jù)分析,有任何疑問,我們技術(shù)都會(huì)即時(shí)給你去電)
3.提供免費(fèi)代測(cè)的服務(wù)。(你只需把標(biāo)本寄過來,我們?yōu)槟愎?jié)省時(shí)間,幫你出結(jié)果,原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù)均可提供,一般時(shí)間是5天左右)
4.客戶有任何問題,我們都是在一個(gè)工作日之內(nèi)給出解決方案。售后和技術(shù)這一塊都是竭誠(chéng)為客戶服務(wù)。