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細菌基因組 DNA 快速提取試劑盒

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100 次
貨號 A-Hc2033 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 僅供科研研究實驗    
細菌基因組 DNA 快速提取試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:耳蝸鼓膜上皮細胞 FAM167A蛋白封閉多肽 自養(yǎng)無枝菌PCR檢測試劑盒 大鼠巨噬細胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit NAD蘋果脫氫(NADMDH)活性比色法檢測試劑盒 露濕漆斑霉 腸炎沙門氏菌抗體

詳細介紹

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

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貨號

細菌基因組 DNA 快速提取試劑盒

100

A-Hc2033

QQ截圖20240110094643.jpg

儲存條件:
 該試劑盒置于室溫(15-25℃)干燥條件下,可保存12個月,更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下,若溶液產(chǎn)生沉淀,使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間,必要時可在37℃水浴中預(yù)熱10min,以溶解沉淀。
產(chǎn)品簡介:
 本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng)提取細菌的基因組DNA。離心吸附柱中材料為本公司新型材料,能夠高效、專一吸附DNA,可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。
產(chǎn)品特點:
簡單快速:1小時內(nèi)即可獲得超純的基因組DNA。
超    純:獲得的DNA純度高,可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實驗。

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PCR基本步驟及注意事項?

一、實驗原理

PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制。在生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應(yīng)同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計的特定序列,實現(xiàn)對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應(yīng)的緩沖環(huán)境;反應(yīng)過程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應(yīng)溫度實現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復(fù)重復(fù)此過程即可實現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

在擴增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴增的反應(yīng)變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應(yīng)。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴增,達到較高水平。因此,應(yīng)適當調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺期前結(jié)束反應(yīng), 減少非特異性產(chǎn)物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

二、主要的成分

1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預(yù)變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預(yù)變性時間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預(yù)變性2min、PCR產(chǎn)物預(yù)變性2min即可。

注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時只有一個引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結(jié)合,從而實現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現(xiàn)PCR反應(yīng)的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

PCR實驗中應(yīng)該注意的問題有哪些?

沒有ct值

檢測結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

2、PCR程序設(shè)置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

3、引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應(yīng)考慮樣本準備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復(fù)凍融;

5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

ct值過晚

在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準確。

因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實驗設(shè)計和目的進行。

1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計不合理, 需要重新設(shè)計;

2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應(yīng), 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足;

4、PCR產(chǎn)物太長。PCR產(chǎn)物設(shè)計超過500bp;

5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或?qū)⒛0暹M行稀釋。

公司正在出售的產(chǎn)品:

不明血吸蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

端粒保護蛋白1ELISA試劑盒 POT1免費代測試劑

牛棒桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

刺五加染料法PCR鑒定試劑盒

博來水解ELISA試劑盒 BLMH免費代測試劑

莢膜組織胞漿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)

戊型肝炎病毒PCR檢測試劑盒

補體受體4ELISA試劑盒

木霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

西尼羅病毒PCR檢測試劑盒

補體成分8γELISA試劑盒

牡蠣皰疹病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒

淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

程序性死亡-1ELISA試劑盒

犬腺體病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

犬鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

存活抗體/生存蛋白ELISA試劑盒

玉米MS PCR檢測試劑盒

犬皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

ELISA試劑盒

牛巨細胞病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

亮熱厲螨PCR檢測試劑盒

蛋白激N1ELISA試劑盒

馬動脈炎病毒PCR檢測試劑盒說明書

鏈球菌BPCR檢測試劑盒

登革熱抗體IgMELISA試劑盒

綿羊星狀病毒2型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

球孢白僵菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)

端錨聚合1ELISA試劑盒

牡蠣皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

柯薩奇病毒A6PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

人過氧化氫(CAT)ELISA試劑盒

牛結(jié)節(jié)疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

禽杯狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

α2巨球蛋白(α2-MG)檢測試劑盒elisa

馬兜鈴染料法PCR鑒定試劑盒

登革病毒3型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

人脯氨肽(PEPD)試劑盒ELISA

雜色青霉探針法熒光定量PCR試劑盒

拉沙熱病毒PCR檢測試劑盒

OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成抗體(OJ/IleRS) ELISA試劑盒

細菌基因組 DNA 快速提取試劑盒枝頂孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒

血清型耶爾森氏菌ail基因常規(guī)PCR檢測試劑盒

人白三烯D4(LTD4)ELISA檢測試劑盒

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