鏈霉親和素磁珠公司正在出售的產品：人胰腺癌細胞　脊髓灰質炎受體相關蛋白1封閉多肽　雞傳染性喉氣管炎病毒即禽皰疹病毒型PCR檢測試劑盒　大鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA檢測試劑盒　半胱氨（Cys）含量活性比色法檢測試劑盒　粉紅單端孢　RAS癌基因家族蛋白RAB40C抗體

公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

鏈霉親和素磁珠是一種高度均勻的超順磁性微球，表面包覆著高密度的超純鏈霉親和素（＞97%）。微球經過專門設計、測試和質量控制，可用于免疫沉淀、細胞分選、快速單步捕獲生物su化分子，如 DNA、RNA、抗體或細胞裂解物或雜交反應中的蛋白質等。鏈霉親和素（或抗生素多倍體）和生物su之間的相互作用表現出已知的最高非共價相互作用之一。抗生物su、鏈霉親和素、單體抗生物su及其類似物已成為探針和親和配體的有力工具，在生化分析、診斷、親和純化和藥物傳遞等領域有著廣泛的應用。鏈霉親和素是一種四聚體生物su結合蛋白，源于鏈霉菌親和素 II，質量為 60000 道爾頓。鏈霉親和素不含碳水化合物，pI 較低，非特異性結合程度較低，使鏈霉親和素成為許多檢測系統的理想試劑選擇。

產品特點: 使用鏈霉親和素-生物su結合系統的優點和益處：

·親和力：鏈霉親和素是同源四聚體，具有較高的生物su結合親和力，具有KD~10?14 米。

·高穩定性：生物su結合復合物具有優異的穩定性，可抵抗 pH、溫度（2°C 和40°C）、苛刻的有機溶劑、變性劑（如氯化胍）、洗滌劑（如 SDS）和蛋白水解酶。

·突出的選擇性和特異性：生物su和鏈霉親和素的相互作用具有高度的特異性，確保了較低的非特異性結合。

·高靈敏度：高穩定性和特異性確保了高檢測靈敏度。

·非常靈活：生物su的小尺寸和顯著穩定性被證明非常適合相對容易地并入各種分子，例如合成聚合物、熒光團、小分子或生物分子中的特定位置，從而對共軛生物分子的結構和功能施加最小的擾動。

鏈霉親和素磁性微球的優點：

·快速、簡單且一步到位的高通量程序：消除了柱狀物或過濾器，或重復費力的移液或 離心（圖 1） ·高結合能力 ·表現出較低的非特異性結合 ·可擴展-可輕松調整樣本大小和自動化

所需材料 ·

Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4 ·磁力分離器（適用于手動操作）： 根據實驗時生物樣品的體積，使用者可以選擇以下不同型號的磁力分離器： 8孔磁力架 可以容納8個單獨的1.5-2.0 ml 離心管 ; 24孔磁力架可以容納24個單獨的1.5-2.0 ml離心管; 4孔磁力-15可以容納 4個單獨的15ml離心管; 4孔磁力架-50可以容納四個單獨的50 ml離心 管。

操作過程：

注: · 該方案是一種通用親和純化程序。為了獲得最佳結果，每個用戶應確定純化單個目標蛋白的最佳工作條件。

·根據粗樣品中目標生物su化分子的數量（基于珠子結合能力），優化每種應用中使用的珠子數量。使用過多的磁珠會導致背景較高，而使用過少的磁珠會導致產量較低。

1. 將最佳量的珠子轉移到離心管中。將管放在磁力架上1-3分鐘。在管留在分離器上的同時去除上清液。

2. 取下試管，用5倍體積的 1x Binding/Washing Buffer通過渦流清洗珠子30秒。將試管置于室溫下1-3分鐘。將管放在磁力架上1-3分鐘。在管留在分離器上的同時去除上清液。

3. 重復步驟二兩次。

向含有目標分子的粗樣品中加入洗滌過的珠子，并在室溫或所需溫度下培養1-2小時（溫度越低，培養時間越長）。

注: 強烈建議進行滴定以優化培養時間。更長時間的孵育可能導致更高的背景。

4. 如步驟 2 所述清洗磁珠，直到 280 nm 處洗脫液的吸光度接近背景水平（OD280<0.05）。

注: 添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑可降低非特異性背景。例如，向洗滌緩沖液中添加NaCl（高達1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X 100或吐溫20。

PCR 反應需要使用哪些試劑和設備？

試劑:
模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產物；
設備：
PCR儀：用于控制反應溫度，保證PCR反應時不同溫度環節的嚴格控制；電泳槽：用于分離PCR擴增產物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是，只有在有序齊全的基礎上，才能進行PCR反應并得出準確結果。

PCR相關基礎實驗：

PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環組成，每個循環包括以下3個步驟：

一、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環階段。

二、退火或稱接合,復性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

三、延伸：

DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應條件優化：

1、變性溫度和時間：

保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續時間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復性溫度和時間:

PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高，產物特異性越高。復性溫度越低，產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

3、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間，可根據待擴增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意，延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

4、循環數:

其他參數選定后，PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環后，PCR產物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環次數。循環次數越多，非特異擴增增加。

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