国产一卡2卡三卡4卡麻豆_了解最新日韩草逼视频_h片在线播放一区_国产激情影视在线_好了av四色综合无码久久_欧美黑白双插OOR720P_日本精品中文字幕在线_秋霞午夜手机影院_亚洲国产一区二区3da毛片_欧美杂交深喉video中文字幕

產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊(cè)

當(dāng)前位置:
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR相關(guān)試劑>>PCR相關(guān)>>2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

返回列表頁(yè)
  • 2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

  • 2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

  • 2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

  • 2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

  • 2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

收藏
舉報(bào)
參考價(jià)468-3900
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

  • 品牌

    其他品牌
  • 廠商性質(zhì)

    經(jīng)銷商
  • 所在地

    上海市

規(guī)格
1ml468元15 盒 可售
10ml3900元15 盒 可售
在線詢價(jià) 收藏產(chǎn)品 加入對(duì)比 查看聯(lián)系電話

更新時(shí)間:2024-01-12 14:51:42瀏覽次數(shù):695

聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1ml、10ml
貨號(hào) A-PJ1030 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 僅供科研研究實(shí)驗(yàn)    
2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)公司正在出售的產(chǎn)品:白血病耐藥株 Kelch樣蛋白26封閉多肽 牛病毒性腹瀉病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 大鼠因子IX(FIX)ELISA Kit 甲基檸檬合(MCS)活性比色法檢測(cè)試劑盒 塔斯曼尼亞弧菌 磷化Runx3抗體

詳細(xì)介紹

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

1ml

A-PJ1030

2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)

10ml

A-PJ1030

RAPA HiFi DNA 聚合酶,其來(lái)源于高保真 DNA 聚合 酶,并加入了增強(qiáng)的延伸結(jié)構(gòu),使其具有超保真性能(~280 倍 Taq)、長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力、高產(chǎn)量。長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力,使用 該酶可輕松擴(kuò)增 8kb 的基因組 DNA、20kb 的λ DNA、8kb 的 cDNA。該酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、強(qiáng) 3’-5’的外切酶活性,產(chǎn)物為平末 端。該制品中已經(jīng)含有溴酚藍(lán)染料,PCR 擴(kuò)增完畢后可直接 點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠,無(wú)需再加入 DNA Loading Buffer。

QQ截圖20240110094643.jpg特點(diǎn)和用途
(1) 超保真擴(kuò)增:~280 倍 Taq 的保真性能,是載體構(gòu)建、點(diǎn)突變、NGS 模板擴(kuò)增、基因合成的最佳用酶。
(2) 快速擴(kuò)增:具有 6kb/min 的擴(kuò)增能力。
(3) 長(zhǎng)片段擴(kuò)增:質(zhì)粒、λDNA 等簡(jiǎn)單模板可以有效擴(kuò)增>20 kb,基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb,cDNA 可以有效擴(kuò)增>8kb。
儲(chǔ)存:長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置于 4°C(3 個(gè)月)保存。
使用方法
1. 按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻:
2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
模板 DNA 1-250 ng
ddH2O up to 25 μl
*模板 DNA 用量參數(shù)(25 μl 反應(yīng)體系)
5-250 ng Genomic DNA
0.1-10 ng Plasmid DNA
1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)
(1)擴(kuò)增片段<5kb 時(shí)采用如下程序
循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間
1st Cycle 95°C 1min
25-35 Cycles
95°C 30s
50~60°C 30s
72°C 6kb/min
Last Cycle 72°C 2min
(2)擴(kuò)增片段>5kb 時(shí)采用如下程序
循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間
1st Cycle 92°C 1min
25-35 Cycles
92°C 30s
50~60°C 30s
72°C 2-3kb/min
Last Cycle 72°C 2min
3. 電泳:1% 瓊脂糖凝膠電泳,上樣 5 μl,電泳結(jié)束在紫外燈下檢測(cè)條帶。
4. 注意事項(xiàng):(1)當(dāng)模板 GC 含量>65%時(shí),請(qǐng)?zhí)砑?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>5× Q-Solution(Cat. No.: A3002)。(2)當(dāng)擴(kuò)增片段<1kb>5kb 時(shí),按照2-3kb/min 的延伸時(shí)間進(jìn)行設(shè)置,能獲得更高的產(chǎn)量。(3)由于不同的 PCR 管其導(dǎo)熱性能有所不同,通常 PCR 采用25μl 體系可以獲得更高的產(chǎn)量。


65.jpg

67.jpg


PCR基本步驟及注意事項(xiàng)?

一、實(shí)驗(yàn)原理

PCR是體外人工選擇性擴(kuò)增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制。在生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應(yīng)同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計(jì)的特定序列,實(shí)現(xiàn)對(duì)特定位置的擴(kuò)增;PCR Buffer提供一個(gè)反應(yīng)的緩沖環(huán)境;反應(yīng)過(guò)程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過(guò)程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過(guò)控制反應(yīng)溫度實(shí)現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復(fù)重復(fù)此過(guò)程即可實(shí)現(xiàn)對(duì)特定片段DNA的大量擴(kuò)增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進(jìn)一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

在擴(kuò)增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來(lái)呈指數(shù)擴(kuò)增的反應(yīng)變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺(tái)效應(yīng)。平臺(tái)期(Plateau)會(huì)使原先由于錯(cuò)配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴(kuò)增,達(dá)到較高水平。因此,應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺(tái)期前結(jié)束反應(yīng), 減少非特異性產(chǎn)物。到達(dá)平臺(tái)期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

二、主要的成分

1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對(duì)于不同類型的模板,其主要不同在于預(yù)變性的時(shí)間以及模板的量。一般對(duì)于大的基因組DNA預(yù)變性時(shí)間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預(yù)變性2min、PCR產(chǎn)物預(yù)變性2min即可。

注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過(guò)在第一輪循環(huán)時(shí)只有一個(gè)引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個(gè)引物均與特異位點(diǎn)結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進(jìn)行PCR擴(kuò)增,原因就在于實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的是DNA聚合酶,只能特意識(shí)別DNA鏈。

2.對(duì)于模版的量來(lái)說(shuō),一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對(duì)于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^(guò)大對(duì)PCR造成影響,故需對(duì)提取的DNA進(jìn)行梯度稀釋。否則濃度過(guò)高則可能會(huì)引起非特異性擴(kuò)增。對(duì)于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,且提取濃度一般較低,則無(wú)需稀釋。

PCR實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問(wèn)題有哪些?

沒有ct值

檢測(cè)結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問(wèn)題:

1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過(guò)45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準(zhǔn));

2、PCR程序設(shè)置錯(cuò)誤,檢測(cè)熒光信號(hào)的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸時(shí)采集信號(hào),另外熒光采集是否選中;

3、引物或探針降解。可通過(guò)PAGE電泳檢測(cè)引物和探針是否降解;

4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過(guò)500ng,根據(jù)試劑盒說(shuō)明書即可), 對(duì)未知濃度的樣本應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應(yīng)考慮樣本準(zhǔn)備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲(chǔ)備,避免反復(fù)凍融;

5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴(kuò)增基因組DNA;上下游引物Tm值超過(guò)4℃以上也會(huì)影響擴(kuò)增)。

ct值過(guò)晚

在相對(duì)定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對(duì)定量中, 對(duì)低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會(huì)增大, 但是一般不宜超過(guò)40循環(huán), 否則定量不準(zhǔn)確。

因此,判斷Ct值出現(xiàn)過(guò)晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和目的進(jìn)行。

1、擴(kuò)增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進(jìn)行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計(jì)不合理, 需要重新設(shè)計(jì);

2、PCR程序不合適, 改用三步法進(jìn)行反應(yīng), 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當(dāng)降低退火溫度; 退火/延伸時(shí)間短(可以在推薦的時(shí)間條件下延長(zhǎng)10s);

3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足;

4、PCR產(chǎn)物太長(zhǎng)。PCR產(chǎn)物設(shè)計(jì)超過(guò)500bp;

5、模板中存在抑制物。用高純度模板進(jìn)行PCR檢測(cè)或?qū)⒛0暹M(jìn)行稀釋。

公司正在出售的產(chǎn)品:

黃曲霉染料法熒光定量PCR試劑盒

丙型肝炎IgGELISA試劑盒 HCV-IgG免費(fèi)代測(cè)試劑

沙眼衣原體染料法熒光定量PCR試劑盒

溶血梭狀桿菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格

促腎上腺皮質(zhì)激樣中葉肽ELISA試劑盒 CLIP免費(fèi)代測(cè)試劑

乳桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

豬痢疾蛇形螺旋體(SH)核檢測(cè)試劑盒

皮膚T-淋巴細(xì)胞關(guān)聯(lián)抗原ELISA試劑盒

貓杯狀病毒PCR檢測(cè)試劑盒

肺炎支原體PCR檢測(cè)試劑盒

單純皰疹病毒Ⅰ+ⅡELISA試劑盒

貓傳染性腹膜炎病毒(貓傳腹病毒)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

馬立克氏病病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒

蛋白酪氨磷受體RELISA試劑盒

刺激隱核蟲探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

禽傳染性支氣管炎病毒Ark型探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

抵抗樣蛋白βELISA試劑盒

口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核檢測(cè)試劑盒

禽結(jié)核分枝桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

動(dòng)力蛋白軸絲重鏈11ELISA試劑盒

葡萄糖苷曼氏桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

馬立克氏病病毒1型探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

多巴胺脫羧ELISA試劑盒

流感病毒H3N2亞型PCR檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

馬蛔蟲探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

耳蝶呤1ELISA試劑盒

牛冠狀病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒

禽波氏桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

泛結(jié)合E2C結(jié)合蛋白E2L3ELISA試劑盒

麥芽香肉桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

梨孢鐮刀菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格

人肺特異性X蛋白(LUNX)ELISA試劑盒

皮炎芽生菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格

諾如病毒/ Ⅱ/ 輪狀病毒 A 組核檢測(cè)試劑盒 ( 三重?zé)晒?PCR )

人黑瘤衍生亮氨拉鏈額外核因子(MLZE)ELISA檢測(cè)試劑盒

三線鐮刀菌染料法熒光定量PCR試劑盒

腦膜炎敗血伊麗莎白菌染料法熒光定量qPCR試劑盒

人催乳(PRL)試劑盒ELISA

無(wú)綠藻通用PCR檢測(cè)試劑盒

小孢子菌屬通用探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

αL艾杜糖苷(IDUA) ELISA試劑盒

2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)嗜衣原體通用探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

豬藍(lán)耳病病毒經(jīng)典型(PRRSV-C)核檢測(cè)試劑盒

人不對(duì)稱二甲基精氨(A)ELISA檢測(cè)試劑盒

普雷沃菌屬通用探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

 


收藏該商鋪

請(qǐng) 登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

對(duì)比框

產(chǎn)品對(duì)比 產(chǎn)品對(duì)比 聯(lián)系電話 二維碼 意見反饋 在線交流

掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪
021-52961053
在線留言
主站蜘蛛池模板: 自贡市| 楚雄市| 都兰县| 江华| 广灵县| 玉林市| 盐边县| 黔东| 长寿区| 宜良县| 永修县| 泰宁县| 旺苍县| 莲花县| 南乐县| 五台县| 新乡县| 宜兴市| 阜新| 陆河县| 门源| 腾冲县| 赤城县| 霍山县| 淄博市| 棋牌| 龙游县| 孟津县| 盐源县| 西乌| 邵东县| 家居| 卓尼县| 绩溪县| 五大连池市| 宣恩县| 普兰县| 临漳县| 大洼县| 柘荣县| 武义县|