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原代細胞培養與操作方法
閱讀：1893 發布時間：2021-1-13原代細胞的培養：
原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。
原代細胞的培養有組織塊培養和分散細胞培養。
組織塊培養是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上，加入培養基后進行培養。
分散細胞培養大致步驟為:
將動物組織從機體中取出離散成單個細胞(常用胰蛋白酶)，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖(注意整個過程無菌)。
原代細胞操作方法：
（1）取成年新西蘭大白兔，耳緣靜脈注射空氣處死后，取下兔子的雙腿，立即用75%乙醇浸泡。
（2）移入細胞房內，去除雙腿表面的皮毛及肌肉，剪取關節段，移至超菌工作臺內。
（3）PBS洗滌數次，用手術刀或彎剪將關節表面的軟骨組織取下。
（4）軟骨組織塊靜置5min，棄去上層液體及懸浮組織，將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒溫搖床中，振蕩消化15-20min；
（5） 4℃靜置5min；棄上清，PBS洗滌，去上清。加入0.2%膠原酶II，置入37℃的恒溫搖床中，振蕩消化2H；
（6）加入生長培養基終止消化，反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min，棄上清，用DMEM*培養基重新懸浮細胞, 放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；
（7）細胞傳代后放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。細胞*展開后即可固定做原代鑒定。