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試劑空白吸光度 是反映試劑質(zhì)量的指標之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍,試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì);如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淀粉酶等檢測試劑會因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負反應,在放置過程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上,吸光度上升的反應,其試劑空白吸光度越低越好,不能超過一個高限;相反,吸光度下降的反應,其試劑空白吸光度不能低于一個低限。因此,試劑空白吸光度限值,常作為程序參數(shù)輸入儀器,如經(jīng)核查超限,儀器會自動報警,提示更換試劑。需要指出的是,還原型輔酶I(或II)等投料量不足或劣質(zhì)的原料,往往需要加大用量,才使“表觀"吸光度上升,湊合過試劑空白核對的“關(guān)",其后果為如下情況:
1、線性范圍變窄 現(xiàn)象:高值測不高。原因:生產(chǎn)試劑時有效成分投料量不足;試劑成份穩(wěn)定性較差。
2、靈敏度變低 現(xiàn)象:酶促反應速度曲線斜率下降,測定結(jié)果有嚴重系統(tǒng)誤差。原因:試劑底物濃度不足。
3、低值偏高 現(xiàn)象:試劑空白的變化曲線(吸光度VS時間)明顯波動。原因:試劑自身不穩(wěn)定,自行分解;工具酶純度
不夠,雜酶含量超限,導致干擾作用。
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