一、ABI_7500熒光定量PCR儀主要特點:
(1)五色熒光檢測,應(yīng)用更廣泛全面,包括:基因表達分析,病原體定量分析,SNP基因型分析以及以陽性內(nèi)對照為基礎(chǔ)的陽性/陰性結(jié)果判定。
(2)新型光路設(shè)計支持更多的熒光標記檢測,包括:FAM™/SYBR®GreenI,VIC®/JOE,NED™/TAMRA™/Cy3®,ROX™/TexasRed®,和Cy5®。
(3)更好的激發(fā)光源設(shè)計使長波長紅色熒光的檢測靈敏度大大提高,強大而靈活的反應(yīng)板設(shè)置指南軟件使反應(yīng)板設(shè)置非常方便,先進的實驗結(jié)果顯示與自動分析工具使實驗數(shù)據(jù)的分析處理更簡單直觀。
(4)新型半導(dǎo)體熱循環(huán)系統(tǒng)支持96孔板和單一0.2ml反應(yīng)管。
(5)將來可以升級至超速定量PCR反應(yīng)模式,大大縮短定量PCR反應(yīng)時間體積小,采用手提電腦或臺式電腦,適用于任何空間的實驗室。
二、ABI_7500熒光定量PCR儀主要應(yīng)用:
(1)實時定量PCR應(yīng)用廣泛,包括基于相對定量分析的基因表達分析,以標準曲線為基礎(chǔ)的病原體定量分析,定性的PCR擴增后核酸序列的SNP基因型分析,以及以陽性內(nèi)對照為基礎(chǔ)的陽性/陰性結(jié)果判定快速熱循環(huán)
(2)7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)的標準模式采用25-100微升反應(yīng)體積,可以采用96孔板或單管/8聯(lián)管進行實驗反應(yīng)。
(3)另外7500還可以升級為快速熱循環(huán)樣品基座,該升級為選購件,由AB公司工程師負責(zé)安裝。快速熱循環(huán)樣品基座采用新型96孔反應(yīng)板,這種反應(yīng)板的管內(nèi)液體上方的空間較小,可以支持5-30微升反應(yīng)體積的實驗。
(4)采用樣品基座升級后的7500,新型96孔反應(yīng)板和新型快速熱循環(huán)定量PCR預(yù)混試劑,實時定量PCR實驗可以在40分鐘內(nèi)完成,實驗效果與標準2小時模式**。
三、實時定量PCR系統(tǒng)分析軟件:
(1)7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)軟件采用WindowsXP®操作系統(tǒng),進行儀器控制,數(shù)據(jù)收集和數(shù)據(jù)分析,軟件功能強大,界面友好,包括如下特色:
反應(yīng)板設(shè)置指南,使實驗設(shè)計非常簡單,即使是復(fù)雜的多重定量實驗也是如此。
擴增反應(yīng)曲線的實時監(jiān)測
自動設(shè)定熒光基線,自動計算熒光閾值使實驗結(jié)果分析大大簡化
采用標準曲線進行靶基因的定量
基因表達相對定量軟件提供強大的結(jié)果分析顯示,可以自動將多達10塊96孔板基因表達實驗的數(shù)據(jù)同時分析。
(2)自動去除無關(guān)項數(shù)據(jù),該軟件為選購件:
自動SNP分型軟件以直觀的圖表輸出分型結(jié)果并自動進行分型質(zhì)量評分
解離曲線數(shù)據(jù)采集操作簡單觀察方便,可以在儀器運行時觀察解離曲線數(shù)據(jù)
觀察實時擴增曲線時可以非常方便的標定所對應(yīng)的樣品孔位置
光源使用時間監(jiān)測及儀器系統(tǒng)自我診斷程序
四、熒光信號檢測:
(1)ABI7500快速型實時熒光定量PCR系統(tǒng)的全部96個樣品孔采用同一鹵鎢燈作為光源,鹵鎢燈光通過五色光源濾光片后激發(fā)每一個分析樣品。鹵鎢燈光源增加光源濾光片后改善了長波長紅色熒光標記的激發(fā)效果,可以大大提高紅色熒光檢測的靈敏度和定量分析的準確性。
(2)激發(fā)后的熒光再通過五色熒光濾光片到達CCD照相機檢測信號。五色熒光濾光片能夠有效地分辨包括:FAM™/SYBR®GreenI,VIC®/JOE,NED™/TAMRA™/Cy3®,ROX™/TexasRed®和Cy5®在內(nèi)的多種熒光染料。
五、介紹:
(1)ABI7500快速型實時定量PCR儀是特異性靶基因檢測與定量的一體化平臺。7500將PCR熱循環(huán),熒光檢測和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合在一起,可以動態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴增產(chǎn)物逐漸增加的情況。
(2)PCR實驗結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產(chǎn)物,無需進行任何實驗操作。
(3)7500型實時熒光定量PCR儀采用96孔反應(yīng)板或單個及8聯(lián)管,反應(yīng)體積25-100微升,實驗可以在不到2小時內(nèi)結(jié)束。與其他人工基因定量分析方法如NorthernblottingorRNase-protectionassays相比,7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)具有時間省,靈敏度高,準確性好和線性范圍寬等優(yōu)點。
(4)7500型實時熒光定量PCR系統(tǒng)由全球?qū)崟r定量PCR技術(shù)的美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司于2004年1月推出,它質(zhì)量優(yōu)異,實驗結(jié)果準確可信,性能價格比極其*。
六、儀器技術(shù)指標:
熱循環(huán)系統(tǒng) | 新型半導(dǎo)體,96個樣品孔,可以升級到96孔快速熱循環(huán)樣品基座 | |
光學(xué)系統(tǒng) | 5色激發(fā)光源,5色熒光濾光片和超低溫CCD成像系統(tǒng) | |
Run Variables | 標準運行模式 | 快速運行模式 |
定量PCR運行時間 | 2 小時 | <40分鐘 |
樣品管類型 | 96孔板或0.2-mL單管 | 96孔板 |
反應(yīng)體積 | 25–100 微升 | 5–30微升 |