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上海瑋馳儀器有限公司
中級會員·5年您現在的位置： 上海瑋馳儀器有限公司>>試劑耗材>> HTRF Phospho-IR-β (Tyr1150 /1151) Detection Kit
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 63ADK016PEH |
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產品介紹
磷酸化胰島素受體 β（Tyr1150/1151）檢測能夠檢測胰島素受體 β 在 Tyr1150/1151 位點的磷酸化。胰島素受體在胰島素和胰島素樣生長因子的刺激下，參與了包括胰島素和 FoxO 信號通路等多個通路。
產品特點
工作原理：
磷酸化胰島素受體 β（Ser177/181）檢測原理：
磷酸化胰島素受體 β（Ser177/181）檢測用于測量在 Ser177/181 位點磷酸化的胰島素受體 β。與蛋白質印跡法不同，該檢測基于微孔板，不需要凝膠、電泳或轉膜。磷酸化胰島素受體 β（Ser177/181）檢測使用兩種標記抗體，一種帶有供體熒光團，另一種帶有受體。第一種抗體因其對蛋白質上磷酸化基序的特異性結合而被選擇，第二種抗體因其能夠識別不依賴于其磷酸化狀態的蛋白質的能力而被選擇。蛋白質磷酸化使得涉及兩種標記抗體的免疫復合物形成，這使供體熒光團與受體緊密接近，從而產生熒光共振能量轉移（FRET）信號。其強度與樣品中存在的磷酸化蛋白的濃度直接成正比，并在無需洗滌的檢測形式下提供了一種評估蛋白質磷酸化狀態的方法。
磷酸化胰島素受體 β（Ser177/181）雙板檢測方案：
雙板方案涉及在 96 孔板中培養細胞，然后進行裂解，接著將裂解物轉移到 384 孔低體積檢測板中，之后加入磷酸化胰島素受體 β（Ser177/181）HTRF 檢測試劑。該方案能夠監測細胞的活力和融合度。
磷酸化胰島素受體 β（Ser177/181）單板檢測方案：
使用 HTRF 試劑檢測磷酸化胰島素受體 β（Ser177/181）可以在一個用于培養、刺激和裂解的單板上進行。無需洗滌步驟。這個為高通量篩選設計的方案能夠實現微型化，同時保持強大的 HTRF 質量。
檢測驗證：
在 HepG2 細胞上的磷酸化胰島素受體 β（Tyr1150/1151）示例：
HepG2 細胞以每孔 100,000 個細胞的密度接種在 96 孔板上。在 37°C、5% 二氧化碳的條件下孵育過夜后，在細胞下加入一系列稀釋的胰島素，在 37°C、5% 二氧化碳的條件下處理 5 分鐘。從細胞中移除刺激培養基，并向細胞中加入 50µL 的裂解緩沖液。通過輕輕振蕩 30 分鐘進行裂解步驟。將 16µL 的樣品轉移到 384 孔小體積板中，然后加入 4µL 的磷酸化胰島素受體 β HTRF 檢測試劑。信號在過夜后記錄。
在 HepaRG 細胞上的磷酸化胰島素受體 β（Tyr1150/1151）示例：
HepaRG 細胞以每孔 200,000 個細胞的密度接種在 96 孔板上。在 37°C、5% 二氧化碳的條件下孵育 5 天后，在細胞下加入一系列稀釋的胰島素，并在存在 30µM 過釩酸鹽的情況下，在 37°C、5% 二氧化碳的條件下處理 5 分鐘。從細胞中移除刺激培養基，并向細胞中加入 50µL 的裂解緩沖液。通過輕輕振蕩 30 分鐘進行裂解步驟。將 16µL 的樣品轉移到 384 孔小體積板中，然后加入 4µL 的磷酸化胰島素受體 β HTRF 檢測試劑。同時，將 16µL 轉移到其他孔中，并加入 4µL 的總胰島素受體 β HTRF 檢測試劑。信號在過夜后記錄。
磷酸化胰島素受體 β（Tyr1150/1151）與蛋白質印跡法的比較：
人類 Hek 293 細胞培養至 80% 融合度。在胰島素和過釩酸鹽共同處理后，細胞被裂解，并通過離心收集可溶性上清液。對細胞裂解物進行系列稀釋，將每種稀釋液的 16µL 轉移到 384 孔低體積白色微孔板中，最后加入磷酸化胰島素受體 β 細胞檢測試劑盒試劑。并行比較顯示，HTRF 磷酸化檢測至少比蛋白質印跡法靈敏 8 倍。
