鏈霉親和素,FITC-Avidin/FITC標記親合素

幾乎所有用于標記的物質均可以同親和素（AV）或鏈霉親合素（SA）結合。小分子的有１２５I、膠體金、熒光素和化學發光物，大分子物質有酶、抗原或抗體、鐵蛋白和熒光蛋白等，其中最常用的是酶、異硫氰酸熒光素（FITC）和膠體金． 親和素或鏈霉親和素均為大分子蛋白，其與酶的標記結合物的制備除可用普通酶標記蛋質分子的直接標記法外．由于其*的與生物素結合的性能，還可以通過與生物素化酶復合物中的生物素結合，間接地與酶形成結合物。

以下舉例介紹幾種制備親和素（或鏈霉親和素）與常用酶形成標記結合物的方法。
 
（一）親和素的標記
  1.HRP-親和素結合物的制備
   （1）改良過碘酸鈉法：新配制的HRP溶液中加入過碘酸鈉（NaIO4），將酶分子上的糖基氧化成醛基；依次用醋酸鹽溶液（pH4.5—5）和碳酸鹽緩沖液（pH9.0）透析，然后在HRP醛基溶液中滴加親和素攪拌反應，HRP的醛基即可與親和素的氨基共價結合；加入（NaBH4）終止反應，再透析、離心去沉淀，上清液即含HRP-AV結合物：
   （2）戊二醛法：用新配制的HRP與親和素溶液充分混勻，加雙功能交聯劑戊二醛室溫反應，后者的二個醛基分別與HRP和親和素分子中的氨基形成Schiff&＃39;s，堿使二者連接，經充分透析去掉未反應戊二醛，再離心去沉淀等雜質，收集上清液（含HRP-AV結合物）。

  2.親和素-生物素化HRP復合物的制備：

  利用親和素與生物素間特異的結合，將親和京素與等體積的生物素化酶（HRP－B）按一定濃度比例混合反應后，親和素即與HRP-B中的生物素結合，形成親和素—生物素化HRP復合物（avidin-biotin-peroxidase complex，ABC）。
      制備ABC復合物時應注意，親和素和HRP-B的濃度應控制不高于40μg／ml和10μg／ml，否則將增加非特異反應。

  3.親和素-生物素化堿性磷酸酶（avidin－biotinylated—alkaline phosphatase，ABAP）復合物的制備:將親和素溶液與生物素化AP按4:l（濃度比）比例混合反應（至少十分鐘）后即可制得ABAP復合物。

（二）鏈霉親和素的標記
  鏈霉親和索（SA）因表面所帶正電荷少，且不含糖基，在實驗中的非特異性結合遠低于親和素，因此目前以鏈霉親和素標記的酶結合物更為常用。
１.HRP-SA結合物的制備　

采用過碘酸鈉直接標記：反應在４℃進行，先在ＨＲＰ中加入NaIO4，然后直接加鏈霉親和素溶液混勻，再用碳酸鹽緩沖液（ＰＨ９．０）透析后，用KBH4終止反應：加飽和硫酸銨沉淀，離心后棄上清液，再用PBS復溶沉淀即得HRP-SA結合物．     

２.SA－生物素化HRP復合物的制備　

按BNHS標記抗體法制備生物素化HRP（ HRP-Ｂ），再將HRP-Ｂ適當稀釋后，加入等體積的鏈霉親和素溶液（HRP-Ｂ與SA濃度比約１：４）反應，即可制得SA－生物素化酶復合物（streptavidin-biotin-peroxidaes complex，SABC）.
3.ＡP-SA結合物的制備　

采用戊二醛二步法：先用飽和硫酸銨沉淀堿性磷酸酶，離心后加過量戊二醛溶液復溶堿性磷酸酶沉詫．戊二醛的一個醛基即與堿性磷酸醇的氨基結合：充分透析除去未結合戊二醛后，加鏈霉親和素與結合了堿性磷酸酶的戊二醛另一個醛基結合，用賴氨酸終止反應，離心后留取含AP-SA結合物上清液備用。

鏈霉親和素,FITC-Avidin/FITC標記親合素
 

Streptavidin-CY5

Streptavidin-CY3

Streptavidin-TRITC

Streptavidin-FITC

Streptavidin-thiol

Avidin-CY3

Avidin-CY5

Avidin-CY5.5

Avidin (without modification)  

Avidin-Sepharose

Avidin-thiol

Avidin-FITC

Avidin-TRITC

HAS- Sepharose beads

HSA-SH

HSA-Biotin

HSA-TRITC

HSA-FITC

HSA-CY5

HSA-CY3

HSA-CY5.5

HSA, without modification

BSA-Sepharose beads

BSA-SH

BSA-Biotin

BSA-TRITC

BSA-FITC

BSA-CY5

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BSA-CY5.5

BSA, without modification

BSA-tetramethylrhodamine

Concanavalin A刀豆求蛋白A產品：

Concanavalin A-CY5

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