詳細介紹
能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學研究和實驗的常規方法,PCR實驗室廣泛應用于生物醫學各個領域,例如:艾滋病檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫物證等等。洛陽實驗室凈化裝修
標準的PCR 實驗室分為四個區域,分別為:
n1.試劑配制區;
n2.樣品處理區;
n3.核酸擴增區;
n4.產物分析區;
如使用全自動分析儀,區域可適當合并。三四區可合并為擴增產物分析。
一、PCR實驗室布局
PCR實驗室原則上為試劑準備區,樣品制備區,擴增區和擴增產物分析區四個單獨的工作區域,并設有走廊,各工作區域應設緩沖間,工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分隔獨立的,各工作區有明顯的標志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區為擴增前區,后兩區為擴增后區,即從:試劑準備區——樣品制備區——PCR擴增室——產物分析室,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區,不得逆向流動。各工作區頂部應該安裝紫外燈,紫外燈波長為254mm,每20㎡一支40W的紫外燈。
PCR實驗室設計規劃平面布局
【各區的功能分別為】
試劑準備區:擴增試劑的配制、分裝和保存。
樣品處理區:樣品登記、分裝;核酸提取、保存和加樣。
擴增產物分析區:擴增產物的測定、結果分析、登記及報告。
擴增前區與擴增后區應嚴格分開,須使用不同的房間,兩區之間建議有一定的間隔。
二、PCR實驗室主要設備
試劑準備區
儀器設備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和離心機等,加樣器、天平除了要外,還應有定期校準。 試劑分裝應在超凈臺中進行 擴增反應混合液應使用分子生物學級的,試劑制備好后應有質檢:一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。
標本制備區
儀器設備主要有生物安全柜、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器
擴增區
擴增區的主要儀器是核酸擴增儀、超凈臺、微量加樣器、離心機、可移動紫外燈。擴增儀需進行校準。并配備UPS電源,以防止由于電壓的波動,停電對擴增效果的影響。
分析區
本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規定的。
三、PCR實驗室建設規劃要點
1、主體結構:
主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金50內圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結構牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
2、標準的三區分隔和氣壓調節:
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個獨立的實驗區。整個區域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區設置有緩沖區, 同時各區通過氣壓調節,使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環境的污染。
可打開緩沖區Ⅰ,緩沖區Ⅱ和 PCR 擴增區的排風扇往外排氣,在實驗區的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調的回風口,空氣通過回風口向室內換氣。
3、 消毒:
在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準備區和標本制備區 還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。
4、機械連鎖不銹鋼傳遞窗:
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)
5、 地面:
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。
6、照明:
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
在建設過程注意事項
●規范的安裝流程和全面的服務流程。
●嚴格按照規范科學設計的安裝流程。
●安裝前需要確定以下安裝條件,如:電源電壓,電源進線位置,電話網絡線進線位置,進水水壓,小安裝空間,地面平整度,通風孔、進水管和下水管的位置等,理想狀態的空間尺寸和通風口尺寸。
四、污染的預防與控制
PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染;天然基因組DA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。洛陽實驗室凈化裝修
4.1工作區域的嚴格劃分
(1)各個實驗區域設置合理
(2)各個實驗區域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面鱖色等),以避免各個不同實驗區域設備物品、試劑等發生混淆。
4.2合理的系統設置
(1)合理的空調通風系統設置,盡量釆用全送全排的空調系統;
2)嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區內不同的壓力要求。
4.3規范的操作
(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓冾格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作
2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;
(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結朿后,必須立即對本區進行清潔。除常規的消毒液體對表面進行摽拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。
4.4嚴格的管理
(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區的門
(2)在各個實驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域;
(3)盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。
4)擴增產物分析區是主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等
5)擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。
4.5完備的實驗室配套設施
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。