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參考價(jià)	面議

蛋白質(zhì)生物學(xué)

蛋白提取和裂解

細(xì)胞器分離

蛋白純化

蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換

蛋白定量

蛋白凝膠電泳

免疫組織化學(xué)

貝博生物

產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 細(xì)菌總蛋白提取試劑盒可以從各種菌體中提取總蛋白，包括革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌，可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為不具有天然活性的蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成

詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。 2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。 3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

細(xì)菌

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便：不需昂貴設(shè)備。 2.可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3.將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。 4.采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。 5.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。 6.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。 7.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。 8.本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī) 2.振蕩器 3..渦旋混勻器 4.移液器 5..冰箱 6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液 2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管 2.吸頭 3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

1.預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要。必須要做預(yù)實(shí)驗(yàn)，在正式實(shí)驗(yàn)之前取少量樣本優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，并像正式樣本一樣認(rèn)真進(jìn)行，看實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否可行，實(shí)驗(yàn)條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性，不同樣本的實(shí)驗(yàn)條件通常差異較大，同種細(xì)胞的不同模型下需要的實(shí)驗(yàn)條件也可能不同，為了避免浪費(fèi)正式樣本和試劑，一定要提前預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。 2.旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。 3.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。 4.蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。 5.可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。 6.本試劑盒中提取液和蛋白酶抑制劑中均不含EDTA，根據(jù)需要可自行加入。

使用方法

1.提取液的準(zhǔn)備：根據(jù)所需要提取的樣本量，每500 μl裂解液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物和5 μl蛋白穩(wěn)定液，充分混勻后置冰上備用。 2.在4℃， 10000×g條件下將菌液離心5 min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。 3.用PBS洗菌體一次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。 4.按每50-100 mg濕重菌體樣本加入250-500 μl提取液，吹打混勻，2-8℃振蕩45-60分鐘。 5.在4℃， 12000×g條件下將菌液離心5分鐘，將上清移入冷的干凈離心管。 6.即得到細(xì)菌總蛋白樣品。 7.將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.蛋白濃度低？處理部分樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。有些革蘭氏陽(yáng)性菌可能較難裂解，有條件的話進(jìn)行超聲處理。 2.用什么方法定量蛋白？建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。 3.提取時(shí)出現(xiàn)膠狀沉淀？蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 4.提取的蛋白具有活性嗎？本試劑盒含有破壞蛋白天然結(jié)構(gòu)的組份，有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白無(wú)法保持其天然構(gòu)象和活性。需要活性蛋白的可以選擇貝博其它貨號(hào)的試劑盒產(chǎn)品。

參考文獻(xiàn)

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