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參考價	面議

蛋白質生物學

蛋白提取和裂解

細胞器分離

蛋白純化

蛋白質濃縮和緩沖液置換

蛋白定量

蛋白凝膠電泳

免疫組織化學

貝博生物

產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 大腸桿菌總蛋白提取試劑盒可以從各種菌體中提取總蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及總蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質量的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。根據不同菌種盒不同的培養情況，每毫升菌液大概可以提得5-10mg蛋白。采用BCA或Lowry法進行蛋白定量。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

大腸桿菌

產品特點

1.使用方便：不需昂貴設備。
2.可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3.將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4.采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
6.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
8.本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

產品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1. 提取液的準備：
根據所需要提取的樣本量，每500 μl提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物和5 μl蛋白穩定液，充分混勻后置冰上備用。
2. 在4℃， 12000×g條件下將菌液離心5分鐘，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。
3. 用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進行下面操作步驟即可。
4. 按每50-100 mg濕重菌體樣本加入500 μl蛋白提取液，充分混勻，振蕩20-30分鐘，
5. 在150 W-300 W，10 s超聲/10 s間隔條件下冰浴超聲至菌液變清。
6. 在4℃， 12000×g條件下將菌液離心15分鐘，將上清移入冷的干凈離心管。
7. 即得到大腸桿菌總蛋白樣品。
8. 將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。部分革蘭氏陽性菌可能較難裂解，進行超聲處理。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

參考文獻

1.HaiFeng Su, et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355）

2.HF Su, et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=5.128）

3.H Shi, et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）

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