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酶聯免疫吸附測定法（ELISA）簡述
閱讀：134 發布時間：2024-9-141971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，即酶聯免疫吸附測定法 (enzyme-linked immuno sorbent assay , ELISA) 。ELISA將抗原或抗體結合在固相載體表面，利用抗原抗體的特異性結合以及抗體或者抗原上標記的酶催化特定底物發生顯色反應，實現目標物檢測的免疫分析方法，可測至皮摩爾（pmol）級別。ELISA已成為分析化學領域中的前沿課題 ，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術( immunoenzymatic techniques ) 的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術 。
一、基本原理
它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑) ②酶標記的抗原或抗體(標記物)③酶作用的底物(顯色劑)。
測量時，抗原(抗體)先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體(抗原)與酶結合成的偶聯物(標記物)，此偶聯物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯物與固相載體上的抗原(抗體)反應結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。
其所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單，方便迅速，特異性強。
二、分類
該法由種類和變化可分為以下幾種:
(一)雙抗體夾心法
(二)間接法
(三)競爭法
(四)雙位點一步法
(五)捕獲法測IgM抗體
(六)應用親和素和生物素的ELISA
三、特點
該法相較其他方法而言，有以下特點：
1. 靈敏性高
該測定法的靈敏度來自作為報告基團的酶。酶是一種有機催化劑，很少量的酶即可誘導大量的催化反應 ，產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實現了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。
2. 特異性強
其特異性來自抗體或抗原的選擇性?？乖贵w的結合實質上只發生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系，所以抗原抗體反應具有高度的特異性。
注意事項：
1）正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2）實驗材料的保存比較重要，一般需要注意的點如下：
※ ELISA試劑盒一般是4℃保存，如果有溶解后的標準品次日需要使用，則需要-20℃，防止降解導致結果不準；
※ 未使用的標準品與未用完的試劑盒一起保存，一般試劑盒拆分后建議一周內使用，由于濕度等影響，長期放置易引起產品的不穩定；
※ 對于洗滌，常規建議機洗，有些較為老款的洗板機由于時間較久，可能加液沖力較大或有固定的洗滌液，可能會導致結果異常，需慎重選擇；
※ ELISA試劑盒正式實驗前，建議先進行預實驗，避免出現濃度超出檢測限導致的結果無法使用的情況；
※ 各家試劑盒可能略有差異，使用前建議詳細閱讀說明書。