服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
自備物品:
15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
操作程序:
由您提供該實(shí)驗(yàn)中目的基因的相關(guān)資料(如:基因名稱、序列等信息),我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線;
商定服務(wù)收費(fèi)、付款方式、服務(wù)期限等,并簽定技術(shù)服務(wù)合同。
有您提供實(shí)驗(yàn)所需的足夠量的實(shí)驗(yàn)樣本(100mg組織或107個(gè)細(xì)胞),本公司不接受您提供的RNA樣本
PCR所需引物/探針(如果用探針?lè)ǎ梢杂赡约禾峁部梢晕斜竟驹O(shè)計(jì)合成(費(fèi)用另計(jì))。如果由您自己提供,必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉,本公司不接受已溶解的引物/探針。
我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴(kuò)增、數(shù)據(jù)分析。
提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)過(guò)程、所用儀器試劑、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用抽取受檢者靜脈血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
二、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
異 >99.0% (GC)(含100ppm BHT穩(wěn)定劑)L-蘋(píng)果 98%人生長(zhǎng)抑(SS)免疫試劑盒
異佛爾酮 97%L-蘋(píng)果 CP人生長(zhǎng)激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)免疫試劑盒
異 ACS, ≥99.5% 順二 AR,99.5%人生長(zhǎng)激釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒
烯異癸酯 98%,含70-100ppm對(duì)二酚穩(wěn)定劑順二 CP,99%人生長(zhǎng)激結(jié)合蛋白(P)免疫試劑盒
甲基烯月桂酯 96%順二 藥用級(jí),EP,USP人生長(zhǎng)激(GH)免疫試劑盒
α-甲基烯 >99.0%(GC),250ppm MEHQ做穩(wěn)定劑D-蘋(píng)果 99%人生長(zhǎng)分化因子-9(GDF-9)免疫試劑盒
α-甲基烯 >99.0%(GC),250ppm MEHQ做穩(wěn)定劑單硬脂甘油酯 >60.0%(GC)人生長(zhǎng)分化因子3(GDF3/UNQ222/PRO248)免疫試劑盒
甲基異丁(MIBC) 99%單硬脂甘油酯 99%(GC)人生長(zhǎng)分化因子2(GDF2)免疫試劑盒
乙酰乙甲酯 CP,98%L-半胱氨 ≥98%,非動(dòng)物源,用于培養(yǎng)人生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)免疫試劑盒
甲基異丁酮 >99.5%(GC)安息香 99.5%人生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)免疫試劑盒
壬基酚 GR聯(lián)甲酰 99.0%人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)免疫試劑盒
壬基酚(混合物) SU安息香二甲 99%人腎損傷分子1(Kim-1)免疫試劑盒
壬基酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品1-羥環(huán)己基酮 98%人腎前體免疫試劑盒
對(duì)壬基酚 85%2-羥基-2-酮 97%人腎(Renin)免疫試劑盒
對(duì)壬基酚 98%乙(95%) AR,95.0%人腎上腺髓質(zhì)前體(Pro-ADM)免疫試劑盒
嗜水氣單胞菌核酸檢測(cè)試劑盒48T小鼠破骨分化因子(ODF)ELISA試劑盒,2--5-原癌基因Bcl-6抗體
小鼠5核(5-NT)ELISA試劑盒,2-氨基-5-甲磷化Bcl-10抗體
大鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒,2-氨基-5-甲磷化死亡調(diào)解子抗體
豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒,2-氨基-5-甲磷化B-Raf抗體
豬白介13(IL-13)ELISA試劑盒,5-吲哚磷化癌易感基因1抗體
豬轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒,5-吲哚芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣1抗體
兔子視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒,5-吲哚癌易感基因復(fù)合物亞基蛋白3抗體
兔子血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)ELISA試劑盒,6-吲哚腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白BAMBI抗體