詳細介紹
基本信息:
產品名稱:果膠甲酯化程度可見分光光度法
測試方法:可見分光光度法
規格 : 50管/48樣
貨號:YS-01S7103
測定意義
植物細胞壁中的果膠是植物初生細胞壁的主要成分,除了起結構支撐、物質運輸等作用外,還具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細胞壁的堅韌程度及其抗性。
測定原理
果膠甲酯鍵經皂化處理后釋放出甲醇,甲醇與2,4-戊二酮反應顯色,在412nm下測定吸光值;同時半乳糖醛酸在70℃下與濃硫酸反應生成5-甲?;?2-呋喃甲酸,5-甲?;?2-呋喃甲酸與3,5-二甲基酚反應產生有色物質,在450nm下有最大吸光值。以甲醇生成量與半乳糖醛酸含量的比值代表果膠甲酯化程度。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、酶標儀、96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水、硫酸。
用途范圍:僅供科研研究實驗
需自配儀器:
1、酶標儀(比色測定波長為450nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、微量移液器
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
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