詳細介紹
苯基瓊脂糖凝膠CL-4B產品概述:
苯基瓊脂糖凝膠CL-4B
英文名稱:Phenyl Sepharose CL-4B
級別:BR
凝膠類型:疏水層析填料
粒 徑:45-165µm
工作PH值:3-13
操作溫度:4-40℃
配基偶聯量:40µmol phenyl/ml 介質
性狀(以下信息僅供參考):含20%乙醇,底部為膠體。
用途:本品僅供科研,不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)
保存:2~8℃
公司優勢:
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Western Blot操作方法:
1.培養細胞蛋白質樣品的制備:
1)在合適的鹽濃度下,應保持蛋白質的最大溶解性和可重復性。
2)選擇合適的表面活性劑和還原劑,破壞所有非共價結合的蛋白質復合物和共價鍵二硫鍵,使其形成一個各自多肽的溶液。
3)盡量去除核酸,多糖,脂類等干擾分子。
4)防止蛋白質在樣品處理過程中的人為的修飾,制備過程應在低溫下進行,以避免細胞破碎釋放出的各種酶類的修飾(建議加入合適的蛋白酶抑制劑)
5)樣品建議分裝成合適的量,然后冷凍干燥或直接以液體狀態置-80℃中保存,但要注意不要反復凍融。
2.組織樣品的制備:
手術切除的組織塊迅速置于預冷的0.95生理鹽水中,漂洗數次,以清潔表面的血跡,將組織稱量后切成幾個較小的組織塊放入機戒組織勻漿器中,按組織凈重,裂解液=1:10的比例,加入相應體積的裂解液進行勻漿,離心收集上清(如有粘稠物可超聲處理,具體方法見細胞培養的樣品制備,也可以冷凍干燥降解核酸后,將凍干的蛋白質樣品溶解在適當的上樣 buffer中,混勻后靜置3小時使樣品中的蛋白質充分的溶解,有5分鐘即可,4度離心收集。)加入Laemmli樣品緩沖液(視蛋白樣品濃度,以1:1或1:2的比例混合)強力混勻,樣品置100度的水浴箱水浴加熱3-5分鐘,10000g離心10分鐘,取上清液,將其轉入另一潔凈的試管中,至此,電泳樣品已準備就緒(樣品即可立即使用也可也可以分裝凍存,-20℃存放的樣品可穩定保持數月。)
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