詳細介紹
細胞名稱 散鱗鏡鯉尾鰭細胞;YZ21培養
形態特性 上皮細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 散鱗鏡鯉尾鰭細胞由長江水產所建立鑒定,用于散鱗鏡鯉尾鰭魚基礎研究和病毒疾病防治研究。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C14
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權限 A類
散鱗鏡鯉尾鰭細胞;YZ21培養貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養瓶內,加入*培養基后繼續培養或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Cyclin C/FITC 熒光素標記周期素C抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-L-HDC /FITC 熒光素標記L-組氨酸脫羧酶抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh caspase-3 p12 subunit 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體 規格 0.1ml
EPOR peptide 紅細胞生成素受體抗原 0.5mg
HECT E3 ubiquitin ligase 英文名稱: HECT E3泛素鏈接酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh SIRT5 沉默調節蛋白5抗體 規格 0.2ml
Anti-L-HDC /FITC 熒光素標記L-組氨酸脫羧酶抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
IL-7Ra/CD127 peptide 白細胞介素-7受體a抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
Anti-AEG-1 AEG-1抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Cdc25B (Ser323) 磷酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體 規格 0.1ml
中性樹膠 100ml 進口原料
Phospho-Wee1(Ser53) 英文名稱: 磷酸化WEE1蛋白抗體 0.1ml
DYX1C1 英文名稱: DYX1C1蛋白抗體 0.2ml
Anti-AEG-1 AEG-1抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗人IgM 0.1ml
GPR180 英文名稱: G蛋白偶聯受體GPR180蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Alpha-Synuclein/Syn/SNCA 核突觸蛋白α抗體 規格 0.1ml
Anti-Kif14 protein /FITC 熒光素標記驅動蛋白家族Member14蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE PE標記的兔抗豚鼠IgM 規格 0.1ml
Anti-Phospho-SirT1 (Ser27)/FITC 熒光素標記磷酸化沉默調節蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-phospho-Cyclin E(Thr62) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化周期素E抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC 熒光素標記磷酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Caspase-1(actived P10) 天冬氨酸-胱氨酸特異性蛋白酶家族抗體 規格 0.1ml
Emp1 (epithelial membrane protein 1) 表皮膜蛋白1抗原 0.5ml
HCST 英文名稱: 造血細胞信號轉導蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh SIPA1 信號誘導增殖相關蛋白1抗體 規格 0.2ml
Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC 熒光素標記磷酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入*培養基繼續培養,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入*培養基繼續培養。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。