細胞名稱  幼兔肺成纖維樣細胞培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維樣細胞

品牌 貼壁生長

特征特性 該細胞系來源于一出生三天的幼兔的正常肺組織。2014年由中科院昆明細胞庫建立。

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

傳代方法 1：

2傳代；3-4天一次  

傳代情況 P2

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 熒光法（-）

STR -

同工酶 無

染色體

使用權(quán)限 A類
幼兔肺成纖維樣細胞培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
Anti-FLAG Tag (CT)/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記 FLAG Tag標(biāo)簽抗體(C端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser221)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh C9orf153 9號染色體開放閱讀框153抗體 規(guī)格 0.2ml

CDK5(Cyclin Dependent Kinase 5) 周期素依賴性激酶5抗原 0.5mg

HAPLN4 英文名稱： 透明質(zhì)酸及粘蛋白4抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh SDCCAG8 結(jié)腸癌抗原8抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser221)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
LDH(Lactate Dehydrogenase) 乳酸脫氫酶抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Hepatocyte 人肝細胞單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Cas (Tyr165) 磷酸化細胞凋亡敏感性基因 規(guī)格 0.1ml

馬血清封閉液 10ml Gibco原料,2%血清

V.cholera Ogawa 英文名稱： 01群小川型霍亂弧菌抗體 0.2ml

phospho-DNA PKcs (Thr2638) 英文名稱： 磷酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體 0.1ml

Anti-Hepatocyte 人肝細胞單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml

GNG11 英文名稱： G蛋白γ11/Gγ11 抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh ANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4 血管生成素3/血管生成素4抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-horse IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格 0.5ml

Anti-Sema3A/FITC 熒光素標(biāo)記臂板蛋白3A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-DARPP32 (Thr75) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化多巴胺、cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Lysozyme/FITC 熒光素標(biāo)記溶菌酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CANX/Calnexin 鈣連蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

DRD5 receptor(dopamine D5 receptor) 多巴胺受體-D5抗原 0.5mg

HERC3 英文名稱： HERC3 E3泛素蛋白連接酶抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh SGLT1/GLT 1 鈉-糖共轉(zhuǎn)運載體1抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-Lysozyme/FITC 熒光素標(biāo)記溶菌酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。